| 目录 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 英文縮写词表 | 第11-13页 |
| 第1章 绪论 | 第13-38页 |
| ·葡萄糖氧化酶的研究现状 | 第13-22页 |
| ·葡萄糖氧化酶的作用原理及其性质 | 第13-14页 |
| ·葡萄糖氧化酶作用原理 | 第13页 |
| ·葡萄糖氧化酶的性质 | 第13-14页 |
| ·葡萄糖氧化酶的应用 | 第14-17页 |
| ·葡萄糖氧化酶在动物饲料中的应用 | 第14-15页 |
| ·葡萄糖氧化酶在食品工业上的应用 | 第15页 |
| ·葡萄糖氧化酶在农业上的应用 | 第15-16页 |
| ·葡萄糖氧化酶在其他方向上的应用 | 第16-17页 |
| ·葡萄糖氧化酶分离纯化的研究现状 | 第17-19页 |
| ·葡萄糖氧化酶的分离和纯化 | 第17-19页 |
| ·葡萄糖氧化酶在基因工程的研究 | 第19-22页 |
| ·黑曲霉葡萄糖氧化酶的分子结构 | 第19页 |
| ·重组葡萄糖氧化酶的基因工程研究 | 第19-22页 |
| ·毕赤酵母的研究现状 | 第22-31页 |
| ·毕赤酵母的形态 | 第22页 |
| ·毕赤酵母发酵的优点 | 第22-24页 |
| ·毕赤酵母宿主菌 | 第24-25页 |
| ·毕赤酵母表达载体 | 第25-28页 |
| ·毕赤酵母表达载体结构功能 | 第26-28页 |
| ·毕赤酵母的发酵体系研究进展 | 第28-30页 |
| ·毕赤酵母发酵体系的应用 | 第30-31页 |
| ·重组毕赤酵母的研究现状 | 第31-37页 |
| ·外源基因拷贝数与表达的关系 | 第31页 |
| ·重组毕赤酵母的表达 | 第31-36页 |
| ·毕赤酵母高产木聚糖酶 | 第31-32页 |
| ·平菇漆酶在毕赤酵母中的表达 | 第32页 |
| ·纤维二糖酶在毕赤酵母中的表达 | 第32页 |
| ·金黄色葡萄球菌蛋白A在毕赤酵母上的表达 | 第32-33页 |
| ·高致病性禽流感病毒H5N1糖蛋白HA1毕赤酵母中的表达 | 第33页 |
| ·凝乳酶在毕赤酵母上的表达 | 第33-34页 |
| ·青霉素G酰化酶在微生物上毕赤酵母上的表达 | 第34页 |
| ·S-腺苷甲硫氨酸的在毕赤酵母的重组突变 | 第34-35页 |
| ·干扰素在毕赤酵母中重组表达 | 第35-36页 |
| ·人成骨细胞刺激因子重组毕赤酵母菌 | 第36页 |
| ·重组毕赤酵母的诱导条件 | 第36-37页 |
| ·碳源的选择 | 第36页 |
| ·低温发酵 | 第36-37页 |
| ·本课题的构想及其意义 | 第37-38页 |
| 第2章 GOD转基因酵母菌的构建及其重GOD的表达分析 | 第38-58页 |
| ·材料 | 第38-45页 |
| ·质粒及菌株 | 第38页 |
| ·主要试剂 | 第38页 |
| ·主要仪器 | 第38-39页 |
| ·培养基和缓冲溶液 | 第39-45页 |
| ·培养基 | 第39-40页 |
| ·试剂、缓冲液配制 | 第40-45页 |
| ·方法 | 第45-51页 |
| ·重组质粒pPIC9K-His-GOD的鉴定 | 第45页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及其连接产物的转化 | 第45-46页 |
| ·CaCl_2法制备大肠杆菌感受态细胞 | 第45-46页 |
| ·重组质粒pPIC9K-His-GOD的转化 | 第46页 |
| ·碱裂解法提取重组质粒pPIC9K-His-GOD | 第46-47页 |
| ·重组质粒pPIC9K-His-GOD的纯化 | 第47页 |
| ·重组质粒pPIC9K-His-GOD的线性化 | 第47-48页 |
| ·重组质粒pPIC9K-His-GOD电转化巴斯德毕赤酵母GS115 | 第48页 |
| ·巴斯德毕赤酵母GS115感受态细胞的制备 | 第48页 |
| ·线性化表达载体电转化巴斯德毕赤酵母GS115 | 第48页 |
| ·转化产物的筛选与鉴定 | 第48-49页 |
| ·转化酵母菌株的筛选 | 第48页 |
| ·提取转化酵母基因组 | 第48-49页 |
| ·检测提取的基因组浓度 | 第49页 |
| ·基因组PCR法鉴定转化酵母菌株 | 第49页 |
| ·多拷贝转化子的筛选 | 第49-50页 |
| ·转化子的诱导发酵 | 第50页 |
| ·转化子的制备 | 第50页 |
| ·转化子的甘油培养 | 第50页 |
| ·转化子的诱导 | 第50页 |
| ·转化子的YEPD培养基的诱导 | 第50页 |
| ·葡萄糖氧化酶的定量分析 | 第50-51页 |
| ·葡萄糖氧化酶的分离和纯化 | 第51页 |
| ·发酵液的上清纯化 | 第51页 |
| ·超声破碎纯化沉淀 | 第51页 |
| ·实验结果与分析 | 第51-56页 |
| ·pPIC9K-His-GOD重组质粒的鉴定 | 第51-52页 |
| ·重组质粒pPIC9K-His-GOD转化大肠杆菌 | 第52页 |
| ·碱裂解法提取重组质粒 | 第52-53页 |
| ·重组质粒pPIC9K-His-GOD的线性化 | 第53页 |
| ·重组质粒转化巴斯德毕赤酵母GS115 | 第53-54页 |
| ·基因组PCR法鉴定转化菌落 | 第54-55页 |
| ·多拷贝转化子的筛选 | 第55页 |
| ·转化子的诱导发酵表达 | 第55-56页 |
| ·讨论 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 附录A：攻读硕士学位期间所发表的论文 | 第64页 |
