| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 目录 | 第7-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-19页 |
| ·鱼类细菌性病害 | 第11页 |
| ·鱼类疫苗的发展及种类 | 第11-14页 |
| ·灭活疫苗 | 第12页 |
| ·减毒活疫苗 | 第12页 |
| ·载体疫苗 | 第12页 |
| ·亚单位疫苗 | 第12页 |
| ·DNA疫苗 | 第12-14页 |
| ·分子佐剂 | 第14-18页 |
| ·分子佐剂的作用机制 | 第15页 |
| ·分子佐剂的分类 | 第15-16页 |
| ·过敏性毒素C3a、C5a | 第16-17页 |
| ·过敏性毒素C3a、C5a作为佐剂的研究 | 第17页 |
| ·鱼类过敏性毒素C5a研究进展 | 第17-18页 |
| ·课题研究背景及意义 | 第18-19页 |
| 第2章 鱼类过敏性毒素C5a的基因克隆 | 第19-28页 |
| ·引言 | 第19页 |
| ·实验材料 | 第19-20页 |
| ·实验用培养基 | 第19页 |
| ·实验用引物,质粒和菌株 | 第19页 |
| ·实验试剂 | 第19-20页 |
| ·实验方法 | 第20-24页 |
| ·鱼类过敏性毒素C5a序列的推定 | 第20页 |
| ·斑马鱼C5a的基因克隆 | 第20-23页 |
| ·罗非鱼及虹鳟C5a基因获得 | 第23-24页 |
| ·实验结果与讨论 | 第24-27页 |
| ·鱼类C5a序列的获得 | 第24页 |
| ·斑马鱼C5a基因克隆 | 第24-26页 |
| ·罗非鱼及虹鳟C5a的基因克隆 | 第26-27页 |
| ·本章小结 | 第27-28页 |
| 第3章 以过敏性毒素C5a为佐剂的重组蛋白疫苗及细菌载体疫苗构建 | 第28-40页 |
| ·引言 | 第28页 |
| ·实验用材料 | 第28-30页 |
| ·实验用菌株、质粒、引物 | 第28页 |
| ·实验用试剂 | 第28-30页 |
| ·实验方法 | 第30-35页 |
| ·抗原与佐剂表达载体的构建 | 第30-32页 |
| ·重组抗原及佐剂蛋白的表达纯化 | 第32-33页 |
| ·载体疫苗体外诱导表达与检测 | 第33-34页 |
| ·斑马鱼的免疫与攻毒 | 第34-35页 |
| ·实验结果与讨论 | 第35-39页 |
| ·抗原GAPDH的表达载体构建与表达纯化 | 第35-36页 |
| ·佐剂C5a的表达载体构建 | 第36页 |
| ·佐剂与抗原融合蛋白的表达载体构建与蛋白纯化 | 第36-37页 |
| ·载体疫苗蛋白表达检测 | 第37页 |
| ·载体疫苗动物实验免疫保护力分析 | 第37-39页 |
| ·本章小结 | 第39-40页 |
| 第4章 以过敏性毒素C5a为佐剂的DNA疫苗开发 | 第40-44页 |
| ·引言 | 第40页 |
| ·实验材料 | 第40页 |
| ·实验用菌株,质粒及引物 | 第40页 |
| ·实验用试剂 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-41页 |
| ·DNA疫苗的构建 | 第40页 |
| ·斑马鱼的免疫与攻毒 | 第40页 |
| ·DNA疫苗免疫保护力的测定 | 第40-41页 |
| ·实验结果分析及讨论 | 第41-42页 |
| ·DNA疫苗PNl-GAPDH-C5a/dArg C5a的构建 | 第41-42页 |
| ·斑马鱼的免疫攻毒 | 第42页 |
| ·本章小结 | 第42-44页 |
| 第5章 以过敏性毒素C5a为佐剂的DNA疫苗优化 | 第44-64页 |
| ·引言 | 第44页 |
| ·实验用材料 | 第44-45页 |
| ·实验用菌株,质粒及引物 | 第44页 |
| ·实验用试剂 | 第44-45页 |
| ·实验方法 | 第45-53页 |
| ·单基因表达系统优化 | 第45-48页 |
| ·双基因表达系统的优化 | 第48-50页 |
| ·优化系统在细胞模型上的评估 | 第50-53页 |
| ·实验结果与讨论 | 第53-63页 |
| ·单基因表达系统优化 | 第56页 |
| ·基因表达系统优化 | 第56-57页 |
| ·表达质粒质量检测 | 第57页 |
| ·HEK293细胞及EPC细胞最佳转染比例确定 | 第57-59页 |
| ·单基因表达系统评估 | 第59-60页 |
| ·双基因表达系统细胞模型评估 | 第60-63页 |
| ·本章小结 | 第63-64页 |
| 第6章 候选疫苗的免疫效力评价 | 第64-77页 |
| ·前言 | 第64页 |
| ·实验材料 | 第64页 |
| ·实验方法 | 第64-66页 |
| ·携带穿膜肽裂解系统的载体疫苗体外诱导表达及免疫剂量确定 | 第64-65页 |
| ·候选DNA疫苗免疫剂量的确定 | 第65-66页 |
| ·斑马鱼免疫与组织提取 | 第66页 |
| ·组织DNA目的基因扩增检测 | 第66页 |
| ·组织内目的基因转录水平检测 | 第66页 |
| ·免疫相关基因转录水平的检测 | 第66页 |
| ·DNA疫苗免疫保护力的测定 | 第66页 |
| ·实验结果与讨论 | 第66-76页 |
| ·携带裂解系统及穿膜肽的载体疫苗免疫保护力分析 | 第66-67页 |
| ·携带裂解系统及穿膜肽的载体疫苗免疫应答过程中相关免疫因子分析 | 第67页 |
| ·DNA疫苗质量检测 | 第67-68页 |
| ·免疫后组织内抗原基因1227的PCR检测 | 第68-70页 |
| ·DNA疫苗给药剂量的确定 | 第70页 |
| ·C5a佐剂配合DNA疫苗使用的免疫保护力分析 | 第70-71页 |
| ·DNA疫苗免疫应答过程中相关免疫因子分析 | 第71-76页 |
| ·本章小结 | 第76-77页 |
| 第7章 结论与展望 | 第77-79页 |
| ·结论 | 第77-78页 |
| ·展望 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
