| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 主要符号对照表 | 第10-12页 |
| 第1章 引言 | 第12-26页 |
| ·问题的提出 | 第12页 |
| ·选题背景和意义 | 第12页 |
| ·文献综述 | 第12-24页 |
| ·TGF-β超家族成员及其信号转导过程 | 第12-17页 |
| ·TGF-β信号转导在受体层面的调控 | 第17-20页 |
| ·TGF-β信号与癌症 | 第20-23页 |
| ·PICK1 的研究进展 | 第23-24页 |
| ·论文研究方法 | 第24-25页 |
| ·论文结构安排 | 第25-26页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第26-31页 |
| ·实验材料 | 第26页 |
| ·实验试剂 | 第26页 |
| ·抗体 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-31页 |
| ·质粒的构建和 RNA 干扰 | 第26-27页 |
| ·细胞培养和转染 | 第27页 |
| ·基于腺病毒感染的蛋白表达系统 | 第27-28页 |
| ·实时定量 PCR | 第28页 |
| ·蛋白降解跟踪与定量 | 第28-29页 |
| ·体外 GST pulldown 检测蛋白结合 | 第29页 |
| ·利用流式细胞仪检测细胞周期 | 第29页 |
| ·TβRI 内吞实验 | 第29-30页 |
| ·免疫组化 | 第30页 |
| ·新鲜肿瘤样本 | 第30-31页 |
| 第3章 PICK1 抑制 TGF-β信号转导 | 第31-41页 |
| ·过量表达 PICK1 蛋白抑制 TGF-β信号转导 | 第31-35页 |
| ·过量表达 PICK1 蛋白抑制 TGF-β报告基因的激活 | 第31-32页 |
| ·在 NMuMG 细胞中过量表达 PICK1 蛋白抑制 TGF-β靶基因的表达 | 第32-33页 |
| ·在 NMuMG 细胞中过量表达 PICK1 蛋白抑制 Smad2 蛋白的磷酸化 .22 | 第33-34页 |
| ·在 NMuMG 细胞中过量表达 PICK1 蛋白拮抗 TGF-β刺激引起的生长阻滞 | 第34-35页 |
| ·小结 | 第35页 |
| ·敲除 Pick1 基因增强 MEF 细胞对 TGF-β信号的响应 | 第35-39页 |
| ·敲除 Pick1 基因促进 TGF-β报告基因的激活 | 第36页 |
| ·敲除 Pick1 基因促进 Smad2 蛋白的磷酸化 | 第36-37页 |
| ·敲除 Pick1 基因促进 TGF-β诱导的细胞形态拉长 | 第37页 |
| ·敲除 Pick1 基因促进 TGF-β诱导的细胞迁移 | 第37-39页 |
| ·小结 | 第39页 |
| ·shRNA 质粒沉默 PICK1 基因促进 TGF-β信号 | 第39-41页 |
| ·靶向 PICK1 的 shRNA 质粒的构建与验证 | 第39-40页 |
| ·在 HEK293 细胞中沉默 PICK1 基因促进 TGF-β报告基因的激活 | 第40页 |
| ·小结 | 第40-41页 |
| 第4章 PICK1 促进 TβRI 降解 | 第41-53页 |
| ·PICK1 直接结合 TβRI | 第41-47页 |
| ·PICK1 与 TGF-β受体的相互作用 | 第41-42页 |
| ·PICK1 与 TβRI 存在内源水平的相互作用 | 第42-43页 |
| ·PICK1 的 PDZ 结构域能够直接结合 TβRI 的胞内段 | 第43-44页 |
| ·K27D28 对于 PICK1（PDZ）结合 TβRI 是必须的 | 第44-46页 |
| ·TβRI 的 C 末端对于其结合 PICK1 是必须的 | 第46-47页 |
| ·小结 | 第47页 |
| ·PICK1 促进 TβRI 降解 | 第47-53页 |
| ·敲除 Pick1 基因提高了 TβRI 的蛋白表达水平 | 第48页 |
| ·敲除 Pick1 基因延长了 TβRI 的半衰期 | 第48-49页 |
| ·过量表达 PICK1 蛋白促进 TβRI 的泛素化 | 第49-50页 |
| ·过量表达 PICK1 蛋白促进 TβRI 通过溶酶体和蛋白酶体两种途径进行降解 | 第50-51页 |
| ·PICK1 蛋白促进 TβRI 降解不受 PKCα及其激酶活性的影响 | 第51-52页 |
| ·小结 | 第52-53页 |
| 第5章 PICK1 促进 TβRI 降解的分子机制研究 | 第53-67页 |
| ·窖蛋白对于 PICK1 调控 TGF-β信号是必须的 | 第53-55页 |
| ·窖蛋白对于 PICK1 抑制 TGF-β报告基因激活是必须的 | 第53-54页 |
| ·窖蛋白对于 PICK1 促进 TβRI 降解是必须的 | 第54页 |
| ·小结 | 第54-55页 |
| ·PICK1 促进 TβRI 与窖蛋白的结合 | 第55-60页 |
| ·PICK1 与窖蛋白间存在相互作用 | 第55页 |
| ·PICK1 通过其 PDZ 结构域结合窖蛋白 | 第55-57页 |
| ·敲除 Pick1 基因减弱了 MEF 细胞中 TβRI 与窖蛋白的相互作用 | 第57页 |
| ·PICK1 能够加强 TβRI 与窖蛋白的相互作用 | 第57-60页 |
| ·小结 | 第60页 |
| ·PICK1 调控 TβRI 的内吞 | 第60-67页 |
| ·PICK1 加强 TβRI 的脂筏定位 | 第60-62页 |
| ·PICK1 抑制 TβRI 通过网格蛋白介导的内吞方式进入细胞 | 第62-63页 |
| ·敲除 Pick1 基因阻断 TβRI 通过窖蛋白介导的内吞方式进入细胞 | 第63-65页 |
| ·PICK1 蛋白的二聚化对于其调控 TβRI 内吞是必须的 | 第65-66页 |
| ·小结 | 第66-67页 |
| 第6章 PICK1 对 TGF-β信号转导的抑制作用与乳腺癌发生发展的关系 | 第67-71页 |
| ·PICK1 通过抑制 TGF-β信号促进乳腺上皮细胞的增殖 | 第67-68页 |
| ·在乳腺上皮细胞 MCF10A 中过量表达 PICK1 蛋白抑制 TGF-β靶基因的表达 | 第67-68页 |
| ·在乳腺上皮细胞 MCF10A 中过量表达 PICK1 蛋白拮抗 TGF-β刺激引起的生长阻滞 | 第68页 |
| ·小结 | 第68页 |
| ·在乳腺癌发展进程中，PICK1 蛋白的表达水平与 TGF-β信号强度呈显著的负相关 | 第68-71页 |
| ·乳腺癌样本中，PICK1 蛋白的表达水平与 Smad2 蛋白的磷酸化水平呈显著的负相关 | 第69页 |
| ·在新鲜乳腺癌样品中，PICK1 与 TβRI 的蛋白表达水平呈显著的负相关 | 第69-70页 |
| ·小结 | 第70-71页 |
| 第7章 总结与展望 | 第71-76页 |
| ·论文总结 | 第71-73页 |
| ·讨论与展望 | 第73-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第84页 |
