芒草驯养牛瘤胃未培养微生物中CMCase的克隆、鉴定、表达及酶学性质初步研究
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-12页 |
| 第一章 文献综述及前言 | 第12-22页 |
| 1 能源植物—芒草的研究与发展战略 | 第12-13页 |
| ·“绿金”代“黑金”的必然性 | 第12页 |
| ·能源植物新秀—芒草 | 第12-13页 |
| ·我国能源植物芒草的发展战略 | 第13页 |
| 2 瘤胃未培养微生物及纤维素分解菌 | 第13-16页 |
| ·未培养微生物 | 第13-14页 |
| ·瘤胃微生物 | 第14-16页 |
| ·瘤胃细菌 | 第14-15页 |
| ·瘤胃原虫 | 第15页 |
| ·瘤胃真菌 | 第15页 |
| ·瘤胃微生物基因组信息 | 第15-16页 |
| 3 瘤胃微生物纤维素酶 | 第16-17页 |
| ·瘤胃微生物纤维素酶的组成 | 第16-17页 |
| ·芒草驯养对发掘牛瘤胃微生物纤维素酶的意义 | 第17页 |
| 4 宏基因组学——探索未培养微生物资源的重要途径 | 第17-20页 |
| ·宏基因组学研究策略 | 第17-18页 |
| ·宏基因组学研究应用进展 | 第18-20页 |
| ·在胃肠道微生物资源挖掘上的应用 | 第18页 |
| ·在口腔微生物研究领域中的应用 | 第18-19页 |
| ·在植物病害生物防治中的应用 | 第19页 |
| ·在自然环境微生物资源挖掘上的应用 | 第19-20页 |
| ·宏基因组技术存在的问题及展望 | 第20页 |
| 5 本论文立题依据、研究目标及技术路线 | 第20-22页 |
| ·题依据 | 第20-21页 |
| ·研究目标 | 第21页 |
| ·技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-32页 |
| 1 材料 | 第22-24页 |
| ·实验动物及饲养 | 第22页 |
| ·实验仪器设备 | 第22页 |
| ·实验药品及试剂 | 第22-24页 |
| 2 方法 | 第24-32页 |
| ·宏基因组Fosmid文库克隆子的提取和保存 | 第24-25页 |
| ·Fosmid文库克隆子的提取 | 第24-25页 |
| ·Fosmid文库克隆子的保存 | 第25页 |
| ·Fosmid文库筛选 | 第25页 |
| ·克隆文库的构建 | 第25-27页 |
| ·Fosmid克隆质粒的提取 | 第25页 |
| ·pUC质粒载体制备 | 第25-26页 |
| ·目的片段酶切产物与pUC19载体的连接 | 第26页 |
| ·连接产物的转化 | 第26-27页 |
| ·克隆文库的筛选 | 第27页 |
| ·菌液PCR检测 | 第27页 |
| ·功能基因序列分析 | 第27页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第27-29页 |
| ·扩增功能基因的编码序列 | 第27-28页 |
| ·PCR扩增 | 第28页 |
| ·pET30a(+)质粒载体的提取 | 第28页 |
| ·制备感受态 | 第28页 |
| ·酶切体系 | 第28页 |
| ·目的基因片段与表达载体DNA连接及转化 | 第28-29页 |
| ·诱导表达条件的优化 | 第29-30页 |
| ·最佳诱导剂剂量的确定 | 第29页 |
| ·最佳诱导温度的确定 | 第29-30页 |
| ·最佳诱导时间的确定 | 第30页 |
| ·CMCase酶学性质初步研究 | 第30-32页 |
| ·CMCase酶活力的测定 | 第30页 |
| ·绘制标准曲线 | 第30页 |
| ·酶活测定 | 第30-31页 |
| ·粗酶液最适pH值的测定 | 第31页 |
| ·粗酶液最适反应温度的测定 | 第31页 |
| ·热稳定性的研究 | 第31页 |
| ·pH稳定性的研究 | 第31页 |
| ·金属离子对酶活力的影响 | 第31-32页 |
| 第三章 结果与分析 | 第32-43页 |
| 1 Fosmid文库的筛选 | 第32-33页 |
| 2 亚克隆文库构建与筛选 | 第33-34页 |
| ·目的片段酶切产物与pUC19载体的连接 | 第33页 |
| ·亚克隆文库筛选结果 | 第33-34页 |
| ·菌液PCR检测 | 第34页 |
| 3 亚克隆序列分析 | 第34-36页 |
| ·序列及其编码氨基酸序列分析 | 第34页 |
| ·理化性质分析 | 第34页 |
| ·功能结构域分析 | 第34-35页 |
| ·信号肽分析 | 第35页 |
| ·Uncel185C10系统进化分析 | 第35-36页 |
| 4 功能基因的原核表达 | 第36-38页 |
| ·构建目的基因表达载体 | 第36-37页 |
| ·重组质粒酶切验证 | 第37页 |
| ·基因工程菌功能验证 | 第37-38页 |
| 5 诱导条件的优化 | 第38-39页 |
| ·最佳诱导剂剂量的确定 | 第38页 |
| ·最佳诱导温度的确定 | 第38-39页 |
| ·最佳诱导时间的确定 | 第39页 |
| 6 CMCase酶学性质分析 | 第39-43页 |
| ·最适反应pH的确定 | 第39-40页 |
| ·最适反应温度的确定 | 第40页 |
| ·CMCase的pH稳定性 | 第40-41页 |
| ·CMCase的温度稳定性 | 第41页 |
| ·金属离子对酶活力 | 第41-43页 |
| 第四章 讨论 | 第43-45页 |
| 第五章 结论、创新点及下一步工作计划 | 第45-46页 |
| 1 结论 | 第45页 |
| 2 创新点 | 第45页 |
| 3 下一步工作计划 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-52页 |
| 附录 | 第52-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 作者简介 | 第56页 |
