β-珠蛋白核基质附着区介导表达载体附着于CHO细胞稳定存在
| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 前言 | 第10-12页 |
| 1 材料与方法 | 第12-36页 |
| ·材料 | 第12-16页 |
| ·菌株、细胞株和质粒 | 第12页 |
| ·实验用品 | 第12页 |
| ·主要仪器 | 第12-13页 |
| ·主要试剂 | 第13页 |
| ·主要试剂的配制 | 第13-16页 |
| ·方法 | 第16-36页 |
| ·MAR序列扩增 | 第16-20页 |
| ·载体构建 | 第20-27页 |
| ·细胞培养 | 第27-28页 |
| ·细胞转染 | 第28-29页 |
| ·筛选稳定单克隆细胞株 | 第29-31页 |
| ·附着体载体的检测 | 第31-34页 |
| ·附着体载体拷贝数的检测 | 第34-36页 |
| ·报告基因egfp的表达量分析 | 第36页 |
| 2 结果 | 第36-48页 |
| ·MAR序列图谱 | 第36-40页 |
| ·pEGFP-MAR载体的构建及酶切、测序鉴定 | 第40-42页 |
| ·最低致死剂量G418浓度的确定 | 第42页 |
| ·CHO细胞稳定单克隆细胞株的筛选 | 第42-43页 |
| ·还原质粒与转染前质粒的酶切鉴定 | 第43-44页 |
| ·PCR鉴定 | 第44-46页 |
| ·测序分析 | 第46-47页 |
| ·附着状态及低拷贝数分析 | 第47页 |
| ·CHO细胞中报告基因egfp的表达量分析 | 第47-48页 |
| 3 讨论 | 第48-52页 |
| ·MAR序列结构、特征与功能 | 第48-49页 |
| ·MAR序列与转基因表达 | 第49-50页 |
| ·MAR序列介导基因表达与宿主细胞 | 第50-51页 |
| ·MAR序列介导质粒附着存在机制的探讨 | 第51页 |
| ·下一步的研究工作 | 第51-52页 |
| ·MAR序列介导的附着载体的临床前应用 | 第52页 |
| 4 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 综述 | 第57-67页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 附录：英文缩略词表 | 第67-68页 |
| 攻读学位期间发表文章情况 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 个人简历 | 第70页 |
