| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 氨基酸及其缩写 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| 1 革兰氏阴性菌对喹诺酮类药物的耐药机制 | 第13-17页 |
| ·染色体突变介导的耐药机制 | 第13-16页 |
| ·细胞内药物蓄积的减少介导的耐药机制 | 第16页 |
| ·质粒介导的耐药机制 | 第16-17页 |
| 2 嗜水气单胞菌气溶素的研究进展 | 第17-20页 |
| ·嗜水气单胞菌气溶素的序列特点 | 第17-18页 |
| ·嗜水气单胞菌气溶素的致病性 | 第18页 |
| ·嗜水气单胞菌气溶素基因的研究现状 | 第18-20页 |
| 3 疫苗的研究进展 | 第20-24页 |
| ·主动免疫 | 第20-22页 |
| ·灭活疫苗 | 第20页 |
| ·弱毒疫苗 | 第20-21页 |
| ·基因工程亚单位疫苗 | 第21-22页 |
| ·核酸疫苗 | 第22页 |
| ·基因工程载体疫苗 | 第22页 |
| ·被动免疫 | 第22-24页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第24-25页 |
| 第二章 嗜水气单胞菌对氟喹诺酮类药物的耐药性研究 | 第25-34页 |
| 1 材料与方法 | 第25-29页 |
| ·供试菌株 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25-26页 |
| ·主要仪器设备 | 第26页 |
| ·菌株最小抑菌浓度(MIC)的测定 | 第26页 |
| ·次抑菌浓度药物诱导产生耐药突变菌 | 第26-27页 |
| ·耐药突变菌GyrA与ParC基因的突变分析 | 第27-29页 |
| ·嗜水气单胞菌基因组DNA的提取 | 第27-28页 |
| ·特异性引物的设计 | 第28页 |
| ·基因的PCR扩增 | 第28-29页 |
| ·PCR产物的检测与测序 | 第29页 |
| ·耐药突变菌的回复突变分析 | 第29页 |
| ·耐药突变株的外排泵机制 | 第29页 |
| ·耐药突变菌对其他类药物的交叉耐药 | 第29页 |
| 2 结果与分析 | 第29-32页 |
| ·耐药菌株的获得 | 第29-31页 |
| ·耐药菌株的gyrA和parC突变分析 | 第31页 |
| ·耐药菌株的回复突变 | 第31页 |
| ·外排泵机制 | 第31页 |
| ·耐药菌株的交叉耐药性 | 第31-32页 |
| 3 讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 嗜水气单胞菌气溶素的原核表达及其多克隆抗血清的制备 | 第34-50页 |
| 1. 材料与方法 | 第35-42页 |
| ·菌株和载体 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·主要仪器设备 | 第35-36页 |
| ·Aer基因的扩增、克隆及测序 | 第36-40页 |
| ·Aer基因的扩增 | 第36-37页 |
| ·PCR产物回收与纯化 | 第37页 |
| ·目的基因的克隆与筛选 | 第37-38页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第38页 |
| ·序列特征和生物信息学分析 | 第38-40页 |
| ·融合表达载体的构建及原核表达 | 第40-42页 |
| ·质粒与表达载体pET-32a(+)的双酶切 | 第40页 |
| ·目的基因与原核表达载体的连接 | 第40页 |
| ·重组质粒的转化 | 第40-41页 |
| ·重组原核表达质粒的双酶切鉴定 | 第41页 |
| ·测序鉴定与分析 | 第41页 |
| ·蛋白的诱导表达 | 第41页 |
| ·融合蛋白的浓缩 | 第41-42页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第42页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第42页 |
| ·Western-blotting | 第42页 |
| 2. 结果 | 第42-48页 |
| ·Aer基因的序列特征 | 第42-45页 |
| ·重组质粒pMD-18T-15的菌液PCR鉴定 | 第45页 |
| ·重组质粒pET32a-15的鉴定 | 第45-46页 |
| ·表达分析 | 第46-47页 |
| ·蛋白的浓缩与免疫原性 | 第47-48页 |
| 3. 讨论 | 第48-50页 |
| 第四章 嗜水气单胞菌的被动免疫保护性研究 | 第50-54页 |
| 1 材料与方法 | 第50-51页 |
| ·试验鱼 | 第50页 |
| ·供试菌株 | 第50页 |
| ·抗血清的被动免疫 | 第50-51页 |
| ·攻毒菌液的准备 | 第51页 |
| ·攻毒 | 第51页 |
| ·凝集抗体效价的测定 | 第51页 |
| ·数据处理 | 第51页 |
| 2 结果与分析 | 第51-52页 |
| ·被动免疫保护性 | 第51-52页 |
| ·凝集抗体效价 | 第52页 |
| 3 讨论 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-65页 |
| 附录1 实验补充图表 | 第65-66页 |
| 附表2 实验中试剂的配制方法 | 第66-68页 |
| 附录3 在读期间发表的论文 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69页 |