| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 1 前言 | 第13-21页 |
| ·罗汉果概述 | 第13-14页 |
| ·罗汉果分布 | 第13页 |
| ·罗汉果的药用及经济价值 | 第13-14页 |
| ·罗汉果苷类的研究概况 | 第14-16页 |
| ·罗汉果苷的生物合成 | 第16-17页 |
| ·糖基转移酶的研究进展 | 第17-18页 |
| ·罗汉果加工和育种现状 | 第18-19页 |
| ·展望 | 第19-20页 |
| ·本课题研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-34页 |
| ·材料 | 第21-23页 |
| ·植物材料 | 第21页 |
| ·菌种及质粒 | 第21页 |
| ·实验主要试剂 | 第21页 |
| ·实验主要仪器 | 第21-22页 |
| ·引物设计 | 第22页 |
| ·基因克隆 | 第22-23页 |
| ·方法 | 第23-34页 |
| ·总RNA的提取方法 | 第23-24页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第24页 |
| ·cDNA快速末端扩增 | 第24-25页 |
| ·RT-PCR反转录 | 第25-26页 |
| ·目的片段的胶回收 | 第26-27页 |
| ·载体连接及转化 | 第27-28页 |
| ·pMD19-T载体的构建及转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞中 | 第27页 |
| ·原核表达载体pEASY~(TM)-E1的构建及转化到Trans1-T1感受态细胞中 | 第27-28页 |
| ·重组pEASY~(TM)-E1质粒转化到表达菌种BL21(DE3)中 | 第28页 |
| ·质粒的提取 | 第28-29页 |
| ·阳性克隆重组子的鉴定 | 第29-30页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第29页 |
| ·质粒酶切鉴定 | 第29-30页 |
| ·DNA测序鉴定 | 第30页 |
| ·sgUDPGl和sgUDPG2 cDNA片段的测序结果分析 | 第30页 |
| ·蛋白质诱导表达 | 第30页 |
| ·镍柱纯化蛋白的步骤 | 第30-31页 |
| ·SDS-PAGE蛋白质电泳 | 第31页 |
| ·Western blotting | 第31-32页 |
| ·质谱鉴定 | 第32页 |
| ·甜苷V含量HPLC测定 | 第32-33页 |
| ·表达谱测定SgUDPG1和SgUDPG2表达丰度 | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-58页 |
| ·总RNA电泳结果 | 第34页 |
| ·罗汉果葡萄糖基转移酶基因SgUDPG1和SgUDPG2的RACE克隆 | 第34-35页 |
| ·罗汉果葡萄糖基转移酶基因SgUDPG1和SgUDPG2的ORF克隆 | 第35-39页 |
| ·SgUDPG1和SgUDPG2的生物信息学分析 | 第39-43页 |
| ·SgUDPG1和SgUDPG2在不同发育时期的表达规律 | 第43-44页 |
| ·原核表达载体重组质粒的构建及鉴定 | 第44-46页 |
| ·重组质粒的诱导表达产物SDS-PAGE分析 | 第46-48页 |
| ·蛋白纯化分析 | 第48-50页 |
| ·Western blotting杂交鉴定 | 第50-52页 |
| ·重组蛋白表达条件优化 | 第52-56页 |
| ·IPTG浓度筛选 | 第52-53页 |
| ·表达温度筛选 | 第53-55页 |
| ·表达时间筛选 | 第55-56页 |
| ·质谱鉴定 | 第56-58页 |
| 4 讨论与结论 | 第58-61页 |
| ·讨论 | 第58-59页 |
| ·结论 | 第59-60页 |
| ·研究的创新点 | 第60页 |
| ·问题与展望 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 附录A:攻读学位期间参与的科研项目及发表的论文 | 第69-70页 |
| 附录B:主要试剂配制 | 第70-73页 |
