| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 1. 绪论 | 第12-27页 |
| ·植物马槟榔的研究现状 | 第12页 |
| ·植物甜蛋白的研究进展 | 第12-18页 |
| ·Brazzein | 第13-14页 |
| ·Miraculin | 第14页 |
| ·Curculin | 第14-15页 |
| ·Monellin | 第15-16页 |
| ·Thaumatin | 第16-18页 |
| ·Pentadin | 第18页 |
| ·植物甜蛋白马宾灵的研究进展 | 第18-20页 |
| ·大肠杆菌重组蛋白表达系统简介 | 第20-21页 |
| ·重组蛋白在大肠杆菌中的可溶表达策略 | 第21-25页 |
| ·选择合适的表达菌株 | 第21页 |
| ·选用分子伴侣或折叠酶共表达 | 第21-22页 |
| ·融合表达 | 第22-24页 |
| ·硫氧还蛋白 | 第22页 |
| ·SUMO | 第22-23页 |
| ·谷胱甘肽转移酶 | 第23页 |
| ·麦芽糖结合蛋白 | 第23页 |
| ·多聚组氨酸标签 | 第23-24页 |
| ·分泌表达 | 第24页 |
| ·表达条件的优化 | 第24-25页 |
| ·改变培养基的组成 | 第24-25页 |
| ·降低培养的温度 | 第25页 |
| ·优化诱导条件 | 第25页 |
| ·本研究的目的意义和研究背景 | 第25-26页 |
| ·本研究的技术路线 | 第26-27页 |
| 2. 材料与方法 | 第27-45页 |
| ·实验材料 | 第27-29页 |
| ·菌株与质粒 | 第27页 |
| ·酶与生化试剂 | 第27页 |
| ·常用试剂盒 | 第27页 |
| ·PCR引物设计 | 第27-29页 |
| ·主要仪器设备 | 第29页 |
| ·常用培养基及实验试剂 | 第29-31页 |
| ·培养基配方 | 第29页 |
| ·实验试剂配方 | 第29-31页 |
| ·可溶性蛋白分离纯化使用的实验试剂 | 第29-30页 |
| ·Western-blot使用的实验试剂 | 第30页 |
| ·Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳使用的实验试剂 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-45页 |
| ·马宾灵基因的剪接重组 | 第31-38页 |
| ·重组马宾灵基因SUMO-B的剪切重组与亚克隆 | 第31-34页 |
| ·重组马宾灵基因SUMO-B的PCR扩增 | 第31页 |
| ·重组马宾灵基因SUMO-B的PCR产物纯化 | 第31-32页 |
| ·重组马宾灵基因SUMO-B与pMD18-T simple连接 | 第32页 |
| ·大肠杆菌TOP10F'感受态细胞的制备与转化 | 第32-33页 |
| ·重组克隆载体pMD18-T-SUMO-B质粒DNA的提取 | 第33页 |
| ·重组克隆载体pMD18-T-SUMO-B的鉴定 | 第33-34页 |
| ·重组克隆载体pMD18-T-SUMO-B的测序及序列分析 | 第34页 |
| ·重组马宾灵基因SUMO-AB的剪切重组与亚克隆 | 第34-35页 |
| ·重组马宾灵基因SUMO-AB的PCR扩增 | 第34-35页 |
| ·重组克隆载体pMD18-T-SUMO-AB的构建 | 第35页 |
| ·重组马宾灵基因SUMO-AMB的剪切重组与亚克隆 | 第35页 |
| ·重组马宾灵基因SUMO-AMB的PCR扩增 | 第35页 |
| ·重组克隆载体pMD18-T-SUMO-AMB的构建 | 第35页 |
| ·全长马宾灵SUMO-MBL的亚克隆 | 第35-36页 |
| ·重组克隆载体pMD18-T-pGEX-B的剪切重组与亚克隆 | 第36页 |
| ·重组马宾灵基因pGEX-B的PCR扩增 | 第36页 |
| ·重组克隆载体pMD18-T-pGEX-B的构建 | 第36页 |
| ·重组马宾灵基因pGEX-AB的剪切重组与亚克隆 | 第36-37页 |
| ·重组马宾灵基因pGEX-AB的PCR扩增 | 第36-37页 |
| ·重组克隆载体pMD18-T-pGEX-AB的构建 | 第37页 |
| ·重组马宾灵基因pGEX-AMB的剪切重组与亚克隆 | 第37页 |
| ·重组马宾灵基因pGEX-AMB的PCR扩增 | 第37页 |
| ·重组克隆载体pMD18-T-pGEX-AMB的构建 | 第37页 |
| ·全长马宾灵pGEX-MBL的亚克隆 | 第37-38页 |
| ·重组马宾灵大肠杆菌表达载体的构建 | 第38-40页 |
| ·大肠杆菌表达载体质粒DNA的双酶切 | 第38页 |
| ·双酶切大肠杆菌表达载体的DNA胶回收 | 第38页 |
| ·重组马宾灵基因的DNA片段的双酶切 | 第38-39页 |
| ·重组马宾灵基因的克隆载体质粒DNA的双酶切 | 第38-39页 |
| ·重组马宾灵基因片段的DNA胶回收 | 第39页 |
| ·重组马宾灵基因与大肠杆菌表达载体的连接 | 第39页 |
| ·重组马宾灵大肠杆菌表达载体的鉴定 | 第39-40页 |
| ·重组马宾灵大肠杆菌表达载体的测序及序列分析 | 第40页 |
| ·重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的构建 | 第40页 |
| ·大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞的制备及转化 | 第40页 |
| ·重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的鉴定 | 第40页 |
| ·重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的诱导表达分析 | 第40-42页 |
| ·重组马宾灵的诱导表达分析 | 第40-41页 |
| ·重组马宾灵的诱导表达蛋白形式分析 | 第41-42页 |
| ·重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的可溶性诱导表达优化 | 第42-43页 |
| ·重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的宿主菌菌株优化 | 第42页 |
| ·重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的诱导起始OD_(600)优化 | 第42页 |
| ·重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的诱导IPTG浓度优化 | 第42-43页 |
| ·重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的诱导乳糖浓度优化 | 第43页 |
| ·重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的大规模诱导表达 | 第43页 |
| ·重组马宾灵的分离纯化 | 第43-44页 |
| ·重组马宾灵的鉴定与活性分析 | 第44-45页 |
| ·重组马宾灵的Western-blot鉴定 | 第44-45页 |
| ·重组马宾灵的甜味活性鉴定 | 第45页 |
| ·重组马宾灵的热稳定性鉴定 | 第45页 |
| 3 结果与分析 | 第45-66页 |
| ·马宾灵基因的重组 | 第45-47页 |
| ·重组马宾灵大肠杆菌表达载体的构建 | 第47-50页 |
| ·重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的构建 | 第50页 |
| ·重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的可诱导表达 | 第50-55页 |
| ·重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的诱导表达分析 | 第50-54页 |
| ·重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的诱导表达蛋白形式 | 第54-55页 |
| ·重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的优化诱导条件 | 第55-63页 |
| ·重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的宿主菌菌株优化 | 第55-57页 |
| ·重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的可溶性诱导起始OD_(600)优化 | 第57-59页 |
| ·重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的可溶性最佳IPTG浓度 | 第59-61页 |
| ·重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的可溶性最佳乳糖浓度 | 第61-63页 |
| ·重组马宾灵的分离纯化 | 第63-64页 |
| ·重组马宾灵的鉴定与活性分析 | 第64-66页 |
| ·重组马宾灵的Western-blot鉴定 | 第64-65页 |
| ·重组马宾灵的甜味活性鉴定 | 第65-66页 |
| ·重组马宾灵的热稳定性鉴定 | 第66页 |
| 4 讨论 | 第66-69页 |
| ·重组马宾灵在大肠杆菌表达系统中的诱导表达蛋白形式 | 第66-67页 |
| ·重组马宾灵在大肠杆菌表达系统中的优化诱导表达条件 | 第67页 |
| ·重组马宾灵可溶性蛋白的分离与纯化过程 | 第67-68页 |
| ·重组马宾灵的Western-Blot鉴定 | 第68页 |
| ·重组马宾灵的甜味活性和热稳定性分析 | 第68-69页 |
| 5 结论 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
