| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-7页 |
| 中英文缩略词表 | 第7-8页 |
| 第1章 引言 | 第8-10页 |
| 第2章 材料与方法 | 第10-30页 |
| ·菌种 | 第10页 |
| ·质粒 | 第10页 |
| ·细胞株 | 第10页 |
| ·常用软件 | 第10页 |
| ·主要仪器 | 第10-11页 |
| ·主要试剂 | 第11-13页 |
| ·质粒构建主要试剂 | 第11页 |
| ·细胞培养及细胞转染的主要试剂 | 第11-12页 |
| ·RT-PCR 实验主要试剂 | 第12页 |
| ·Western Blot 实验主要试剂 | 第12-13页 |
| ·主要试剂的配制 | 第13-16页 |
| ·细胞培养主要试剂配制 | 第13页 |
| ·RT-PCR 实验主要试剂配制 | 第13-14页 |
| ·Western Blot 实验主要试剂配制 | 第14-15页 |
| ·大肠杆菌培养主要试剂配制 | 第15-16页 |
| ·miRNA 重组表达载体的构建与测序 | 第16-20页 |
| ·重组质粒序列设计与合成 | 第16-17页 |
| ·重组质粒的转化 | 第17-18页 |
| ·质粒抽提与测序鉴定 | 第18-20页 |
| ·沉默效应检测 | 第20-29页 |
| ·重组质粒转染 U2OS 细胞 | 第20-23页 |
| ·RT-PCR 检测细胞 VCP mRNA 表达水平 | 第23-25页 |
| ·Western Blot 检测细胞 VCP 蛋白的表达水平 | 第25-28页 |
| ·MTT 检测细胞体外增殖情况 | 第28-29页 |
| ·Transwell Migration 检测细胞体外迁移情况 | 第29页 |
| ·统计处理 | 第29-30页 |
| 第3章 结果 | 第30-36页 |
| ·靶向 VCP 的 miRNA 重组表达质粒构建结果 | 第30-31页 |
| ·靶向 VCP 的 miRNA 重组表达质粒测序结果 | 第31页 |
| ·质粒电泳结果 | 第31-32页 |
| ·总 RNA 电泳结果 | 第32页 |
| ·miRNA 干扰后 VCP mRNA 的表达情况 | 第32-33页 |
| ·miRNA 干扰后 VCP 的蛋白表达情况 | 第33-34页 |
| ·沉默 VCP 后 U2OS 细胞增殖情况 | 第34页 |
| ·沉默 VCP 后 U2OS 细胞迁移情况 | 第34-36页 |
| 第4章 讨论 | 第36-39页 |
| 第5章 结论与展望 | 第39-40页 |
| 致谢 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-44页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第44-45页 |
| 综述 | 第45-52页 |
| 参考文献 | 第49-52页 |
