| 致谢 | 第1-6页 |
| 前言 | 第6-7页 |
| 中文摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-14页 |
| 英文缩写词表 | 第14-16页 |
| 目次 | 第16-20页 |
| 第一章 引言 | 第20-29页 |
| ·钩端螺旋体 | 第20-21页 |
| ·钩端螺旋体病 | 第21页 |
| ·细菌的粘附与细胞外基质(ECM) | 第21-22页 |
| ·整合素(integrin) | 第22-23页 |
| ·小窝(caveolae)及小窝蛋白-1(CAV-1) | 第23-24页 |
| ·FAK和PI3K | 第24-25页 |
| ·细胞骨架与细菌入侵 | 第25-26页 |
| ·跨膜运输 | 第26页 |
| ·研究内容及策略 | 第26-27页 |
| ·钩体与ECM分子的粘附(ELISA) | 第26页 |
| ·THP-1、J774 和 HUVEC 三种细胞 ECM 分子的分布 | 第26页 |
| ·THP-1、J774和HUVEC三种细胞吞嗟钩体情况 | 第26页 |
| ·THP-1、J774 和 HUVEC 表面 ITGBl，ITGB2, ITGB3 和 CAV-1分布 | 第26页 |
| ·钩体感染THP-1、J774和HUVEC三种细胞内吞泡提取，及内吞泡表面ITGB1，ITGB2, ITGB3和CAV-1分布 | 第26页 |
| ·ITGB1、ITGB2、ITGB3和CAV-1在三种细胞中与钩体内吞的关系 | 第26-27页 |
| ·FAK,PI3K在三种细胞中与钩体内吞的关系 | 第27页 |
| ·微丝和微管在三种细胞中与钩体内吞的关系 | 第27页 |
| ·HUVEC对钩体的跨膜转运 | 第27页 |
| ·钩体被三种细胞内吞后的菌体活力 | 第27页 |
| ·细胞中钩体与lysosoms及CAV-1的共定位 | 第27页 |
| ·研究意义 | 第27-29页 |
| 第二章 钩体与ECM分子粘附、细胞表面ECM分子分布及THP-1,J774A.1和HUVEC对钩体内吞情况 | 第29-41页 |
| ·材料及方法 | 第29-34页 |
| ·试剂及仪器 | 第29-30页 |
| ·细胞株及菌株的来源和培养 | 第30-31页 |
| ·钩体对ECM分子的粘附试验 | 第31页 |
| ·ECM分子对问号钩体黏附竞争性抑制试验 | 第31页 |
| ·免疫荧光检测细胞表面ECM分子分布 | 第31-32页 |
| ·标准曲线制作 | 第32页 |
| ·透射电镜观察THP-1、J774A.1和HUVEC对钩体的内吞 | 第32-33页 |
| ·细胞内吞钩体的免疫荧光检测 | 第33-34页 |
| ·统计学分析方法 | 第34页 |
| ·实验结果 | 第34-39页 |
| ·钩体黏附于ECM分子 | 第34-35页 |
| ·细胞表面ECM分子分布情况 | 第35-37页 |
| ·THP-1、J774A.1和HUVEC对钩体的内吞 | 第37-39页 |
| ·讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 THP-1、J774A.1和HUVEC中钩体内吞相关受体在的鉴定 | 第41-59页 |
| ·材料及方法 | 第41-52页 |
| ·试剂及仪器 | 第41-44页 |
| ·细胞株及菌株的来源和培养 | 第44-45页 |
| ·流式检测细胞表面标记ITGB1、ITGB2、ITGB3和CAV-1 | 第45-46页 |
| ·THP-1、J774A.1和HUVEC钩体内吞泡的提取 | 第46-47页 |
| ·western blot实验方法 | 第47-48页 |
| ·抑制三种细胞表面ITGB1,ITGB2,ITGB3和CAV-1,检测细胞内钩体的变化 | 第48-49页 |
| ·RNA提取、反转录(RT)及Real time PCR | 第49-51页 |
| ·统计学分析方法 | 第51-52页 |
| ·实验结果 | 第52-57页 |
| ·流式细胞术检测THP-1、J774A.1和HUVEC表面ITGB1、ITGB2、ITGB3和CAV-1分布 | 第52页 |
| ·THP-1、J774A.1和HUVEC中钩体内吞泡ITGB1、ITGB2、ITGB3和CAV-1的分布差异 | 第52-53页 |
| ·ITGB1、ITGB2、ITGB3和CAV-1在THP-1、J774A.1和HUVEC内吞钩体中的作用 | 第53-57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| 第四章 FAK、PI3K、微丝和微管在THP-1、J774A.1和HUVEC内吞钩体中的作用 | 第59-72页 |
| ·材料及方法 | 第59-63页 |
| ·试剂及仪器 | 第59-60页 |
| ·细胞株及菌株的来源和培养 | 第60-61页 |
| ·FAK和PI3K磷酸化变化的检测 | 第61页 |
| ·FAK、PI3K、微丝和微管抑制剂作用后,细胞内吞钩体的变化 | 第61-62页 |
| ·微丝和微管的染色方法 | 第62-63页 |
| ·统计学分析方法 | 第63页 |
| ·实验结果 | 第63-70页 |
| ·钩体感染THP-1,J774A.1和HUVEC后FAK和PI3K的变化 | 第63-65页 |
| ·FAK和PI3K抑制剂作用THP-1,J774A.1和HUVEC,细胞内钩体的变化 | 第65-66页 |
| ·THP-1、J774A.1和HUVEC内吞钩体过程中,微丝发生重排而微管无重排 | 第66-68页 |
| ·微丝和微管抑制剂作用三种细胞,细胞内吞钩体的变化 | 第68-70页 |
| ·讨论 | 第70-72页 |
| 第五章 钩体在HUVEC中跨膜转运 | 第72-81页 |
| ·材料及方法 | 第72-76页 |
| ·试剂及仪器 | 第72-73页 |
| ·细胞株及菌株的来源和培养 | 第73页 |
| ·激光共聚焦图像三维重建HUVEC对钩体的跨膜转运 | 第73-74页 |
| ·Transwell检测HUVEC转运钩体 | 第74页 |
| ·HUVEC胞内CAV-1与问号钩体共定位 | 第74-75页 |
| ·统计学分析方法 | 第75-76页 |
| ·实验结果 | 第76-79页 |
| ·3D重建钩体在HUVEC中的情况 | 第76页 |
| ·HUVEC对钩体的跨膜转运 | 第76-78页 |
| ·ITGB1、ITGB2和ITGB3抗体封闭及filipin处理对钩体跨膜的影响 | 第76-77页 |
| ·siRNA干扰ITGB1、ITGB2、ITGB3及CAV-1对钩体跨膜的影响 | 第77-78页 |
| ·HUVEC胞内CAV-1与问号钩体共定位 | 第78-79页 |
| ·讨论 | 第79-81页 |
| 第六章 THP-1、J774A.1和HUVEC中钩体和溶酶体融合情况 | 第81-85页 |
| ·材料及方法 | 第81-83页 |
| ·试剂及仪器 | 第81页 |
| ·细胞株及菌株的来源和培养 | 第81-82页 |
| ·THP-1、J774A.1和HUVEC中溶酶体与钩体的共定位 | 第82-83页 |
| ·实验结果 | 第83-84页 |
| ·THP-1和J774A.1中钩体与溶酶体共定位,HUVEC中钩体不与溶酶体共定位 | 第83-84页 |
| ·讨论 | 第84-85页 |
| 第七章 结论 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-96页 |
| 主要溶液及配置方法 | 第96-99页 |
| 作者简介及在读期间所取得的科研成果 | 第99页 |
