| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略语 | 第6-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-14页 |
| 1 杆状病毒的研究进展 | 第9页 |
| ·杆状病毒简述 | 第9页 |
| ·杆状病毒基因组的研究进展 | 第9页 |
| 2 杆状病毒晚期基因表达因子 LEFS 的研究进展 | 第9-12页 |
| ·杆状病毒调控基因的研究 | 第9-10页 |
| ·参与病毒 DNA 复制的 lef 基因 | 第10-11页 |
| ·参与病毒基因转录的 lef 基因 | 第11-12页 |
| 3 Red 重组技术的研究进展 | 第12-14页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第14-17页 |
| 1 研究的目的和意义 | 第14页 |
| 2 研究的主要内容 | 第14-16页 |
| 3 实验流程图 | 第16-17页 |
| 第三章 lef-10的生物信息学分析 | 第17-23页 |
| 1 生物信息学工具 | 第17页 |
| 2 方法 | 第17-18页 |
| 3 结果 | 第18-21页 |
| ·lef-10 基因的序列分析 | 第18页 |
| ·LEF-10 的疏水性分析 | 第18-19页 |
| ·LEF-10 的信号肽分析 | 第19-20页 |
| ·LEF-10 的跨膜区分析 | 第20页 |
| ·LEF-10 的二级结构预测 | 第20页 |
| ·LEF-10 氨基酸序列的同源性分析 | 第20-21页 |
| 4 讨论 | 第21-23页 |
| 第四章 家蚕核型多角体病毒 lef-10缺失和补回型病毒的构建 | 第23-38页 |
| 1 材料与试剂 | 第23-25页 |
| ·材料 | 第23页 |
| ·试剂 | 第23页 |
| ·试剂配置 | 第23-25页 |
| 2 方法 | 第25-33页 |
| ·pKD46 质粒的获得 | 第25-26页 |
| ·用 CaCl2法将 pKD46质粒转化到大肠杆菌 DH10Bac中 | 第26页 |
| ·含有 pKD46 质粒的 DH10Bac 菌株的获得及感受态制备 | 第26-27页 |
| ·lef-10 基因打靶线性片段的制备 | 第27-28页 |
| ·lef-10 缺失型 Bacmid 的获得 | 第28页 |
| ·lef-10 基因缺失型 Bacmid 的 PCR 鉴定 | 第28-29页 |
| ·转移载体 pFastBac1-lef10 的构建 | 第29-31页 |
| ·lef-10 基因补回型 Bacmid 的构建 | 第31-32页 |
| ·lef-10 基因补回型 Bacmid 的 PCR 鉴定 | 第32-33页 |
| 3 结果 | 第33-37页 |
| ·lef-10 基因打靶线性化片段的鉴定 | 第33-34页 |
| ·lef-10 基因缺失型 Bacmid 的鉴定 | 第34-35页 |
| ·转移载体 pFastBac1-lef10 的 PCR 和双酶切鉴定 | 第35-36页 |
| ·lef-10 基因补回型病毒 lef10-re-Bacmid 的鉴定 | 第36-37页 |
| 4 讨论 | 第37-38页 |
| 第五章 lef-10缺失对 BmNPV 病毒复制的影响 | 第38-46页 |
| 1 材料与试剂 | 第38页 |
| ·材料 | 第38页 |
| ·试剂 | 第38页 |
| 2 方法 | 第38-42页 |
| ·家蚕细胞的培养与冻存、复苏 | 第38-39页 |
| ·病毒 DNA 的提取 | 第39页 |
| ·脂质体介导病毒 DNA 转染家蚕 BmN 细胞 | 第39页 |
| ·病毒滴度测定 | 第39-40页 |
| ·病毒基因组的提取和消化 | 第40页 |
| ·荧光定量 PCR 分析 | 第40-42页 |
| 3 结果 | 第42-45页 |
| ·lef-10 缺失型病毒感染细胞情况 | 第42页 |
| ·lef-10 缺失型病毒病毒增殖曲线分析 | 第42-43页 |
| ·lef-10 基因缺失对病毒 DNA 复制的 qPCR 分析 | 第43-45页 |
| 4 讨论 | 第45-46页 |
| 第六章 lef-10缺失对 BmNPV 病毒各时期基因转录的影响 | 第46-55页 |
| 1 材料与试剂 | 第46页 |
| ·材料 | 第46页 |
| ·试剂 | 第46页 |
| 2 方法 | 第46-49页 |
| ·lef-10 缺失型病毒转染 BmN 细胞 | 第46-47页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第47页 |
| ·荧光定量 PCR 引物的设计 | 第47页 |
| ·DNA 酶去除总 RNA 中的基因组 DNA | 第47-48页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第48页 |
| ·荧光定量 PCR | 第48-49页 |
| ·荧光定量 PCR 数据分析 | 第49页 |
| 3 结果 | 第49-53页 |
| ·病毒早期基因 lef-3 转录的 qRT-PCR 分析 | 第49-50页 |
| ·病毒晚期基因 vp39 转录的 qRT-PCR 分析 | 第50-52页 |
| ·病毒极晚期基因 p10 转录的 qRT-PCR 分析 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| 第七章 lef-10缺失对 BmNPV 病毒各时期基因表达的影响 | 第55-59页 |
| 1 材料与试剂 | 第55-56页 |
| ·材料 | 第55页 |
| ·主要试剂的配制 | 第55-56页 |
| 2 方法 | 第56-57页 |
| ·不同时间点收集病毒感染后的 BmN 细胞 | 第56页 |
| ·Western blot 检测蛋白的表达 | 第56-57页 |
| 3 结果 | 第57-58页 |
| ·Western blot 鉴定 LEF-10 蛋白 | 第57-58页 |
| ·Westren blot 检测病毒早期蛋白的表达情况 | 第58页 |
| 4 讨论 | 第58-59页 |
| 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
