| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-24页 |
| 第一章 天然调节性T细胞的研究进展 | 第12-20页 |
| 1 Treg的历史 | 第12页 |
| 2 Treg的分类 | 第12-13页 |
| 3 nTreg的产生部位与作用机制 | 第13页 |
| 4 nTreg的特异性标志物 | 第13-14页 |
| 5 nTreg的抗原特异性 | 第14页 |
| 6 nTreg对宿主与病原体相互作用的影响 | 第14-16页 |
| 7 各种传染病中nTreg的研究 | 第16-20页 |
| ·病毒感染中nTreg的研究 | 第16-18页 |
| ·疱疹病毒科 | 第17页 |
| ·小核糖核酸病毒科 | 第17页 |
| ·逆转录病毒科 | 第17-18页 |
| ·寄生虫感染中nTreg的研究 | 第18页 |
| ·霉菌感染中nTreg的研究 | 第18-20页 |
| 第二章 Foxp3的研究进展 | 第20-24页 |
| 1 Foxp3作为nTreg特异标志物的发现 | 第20页 |
| 2 Foxp3的基本结构及相关功能 | 第20-21页 |
| 3 Foxp3在nTreg发育和功能中的重要作用 | 第21-24页 |
| 第二部分 试验研究 | 第24-58页 |
| 第一章 猪Foxp3基因片段的克隆与原核表达 | 第24-36页 |
| 摘要 | 第24页 |
| 1 材料与方法 | 第24-30页 |
| ·菌株与质粒 | 第24-25页 |
| ·主要酶与试剂 | 第25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25页 |
| ·目的基因的合成、扩增与回收 | 第25-26页 |
| ·目的基因的优化与合成 | 第25页 |
| ·引物设计与合成 | 第25页 |
| ·PCR扩增体系与条件 | 第25-26页 |
| ·PCR产物的胶回收 | 第26页 |
| ·重组质粒的构建 | 第26-28页 |
| ·质粒的提取 | 第26-27页 |
| ·PCR扩增产物和质粒的双酶切 | 第27页 |
| ·连接 | 第27-28页 |
| ·重组菌的构建 | 第28页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第28页 |
| ·连接产物的转化 | 第28页 |
| ·重组菌的鉴定 | 第28页 |
| ·融合蛋白的诱导表达和纯化 | 第28-30页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第29页 |
| ·融合蛋白的纯化与复性 | 第29-30页 |
| 2 结果 | 第30-33页 |
| ·基因序列的优化和合成 | 第30-31页 |
| ·猪Foxp3基因的PCR | 第31页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第31-32页 |
| ·测序鉴定 | 第32页 |
| ·融合蛋白的表达和鉴定 | 第32-33页 |
| 3 讨论 | 第33-34页 |
| ABSTRACT | 第34-36页 |
| 第二章 单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及多抗血清的制备 | 第36-48页 |
| 摘要 | 第36页 |
| 1 材料与方法 | 第36-41页 |
| ·细胞、试验动物及试剂 | 第36-37页 |
| ·主要仪器设备 | 第37页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第37-38页 |
| ·免疫动物 | 第37页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第37页 |
| ·SP2/0骨髓瘤细胞的培养 | 第37-38页 |
| ·细胞融合 | 第38页 |
| ·筛选 | 第38页 |
| ·杂交瘤细胞的克隆化 | 第38页 |
| ·杂交瘤细胞分泌抗体的稳定性 | 第38页 |
| ·单克隆抗体的大量制备及鉴定 | 第38-40页 |
| ·腹水的诱导 | 第38-39页 |
| ·培养上清/腹水效价的测定 | 第39页 |
| ·亚类测定 | 第39页 |
| ·单克隆抗体特异性的测定 | 第39-40页 |
| ·腹水的纯化、浓缩和纯度测定 | 第40页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第40-41页 |
| ·制备方法 | 第40页 |
| ·多抗血清效价的测定 | 第40页 |
| ·多抗血清特异性的测定 | 第40-41页 |
| ·多抗血清的纯化、浓缩和纯度测定 | 第41页 |
| ·外周血淋巴细胞的提取 | 第41页 |
| 2 结果 | 第41-45页 |
| ·细胞培养上清与腹水的效价和抗体型 | 第41页 |
| ·单克隆抗体的特异性 | 第41-42页 |
| ·单抗的纯化和检测 | 第42-43页 |
| ·多抗的效价 | 第43-44页 |
| ·多抗的特异性 | 第44页 |
| ·多抗的纯化和检测 | 第44-45页 |
| 3 讨论 | 第45-47页 |
| ABSTRACT | 第47-48页 |
| 第三章 检测猪Foxp3间接夹心ELISA方法的建立及初步应用 | 第48-58页 |
| 摘要 | 第48页 |
| 1 材料与方法 | 第48-53页 |
| ·材料 | 第48-49页 |
| ·试验仪器 | 第49页 |
| ·间接夹心ELISA的操作程序 | 第49页 |
| ·间接夹心ELISA方法条件的优化 | 第49-52页 |
| ·抗原和检测抗体的最佳稀释浓度的确定 | 第50页 |
| ·捕获抗体最佳稀释浓度的确定 | 第50-51页 |
| ·酶标抗体最佳稀释比例的确定 | 第51-52页 |
| ·检测各反应成分间的交叉反应程度 | 第52页 |
| ·敏感度和工作范围的确定 | 第52页 |
| ·重复性试验 | 第52页 |
| ·临床应用 | 第52-53页 |
| 2 结果 | 第53-56页 |
| ·间接夹心ELISA的最佳反应条件 | 第53-54页 |
| ·抗原和检测抗体的最佳稀释度 | 第53页 |
| ·捕获抗体的最佳稀释度 | 第53-54页 |
| ·酶标抗体的最佳稀释比例 | 第54页 |
| ·各反应成分间的交叉反应程度 | 第54-55页 |
| ·敏感度和工作范围的确定 | 第55-56页 |
| ·重复性的确定 | 第56页 |
| ·临床应用 | 第56页 |
| 3 讨论 | 第56-57页 |
| ABSTRACT | 第57-58页 |
| 全文总结 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-68页 |
| 缩略语及符号 | 第68-70页 |
| 附录 | 第70-72页 |
| 致谢 | 第72页 |