| 前言 | 第1-5页 |
| 中文摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-15页 |
| 第1章 绪论 | 第15-28页 |
| ·引言 | 第15-16页 |
| ·文献综述 | 第16-28页 |
| ·凝集素的分类 | 第16-17页 |
| ·植物凝集素的分类 | 第17-20页 |
| ·植物凝集素的特异性 | 第20-21页 |
| ·植物凝集素的生理功能 | 第21页 |
| ·凝集素在肿瘤研究中的应用 | 第21-24页 |
| ·植物凝集素与细胞凋亡途径 | 第24-25页 |
| ·槲寄生凝集素与肿瘤研究进展 | 第25-28页 |
| 第2章 重组槲寄生凝集素毕赤酵母高效分泌表达体系的建立 | 第28-48页 |
| ·实验材料 | 第28-30页 |
| ·主要菌株和质粒 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28页 |
| ·主要仪器 | 第28-29页 |
| ·主要试剂的配置 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-39页 |
| ·rVAA-I 基因的全合成及克隆载体的构建 | 第30页 |
| ·rVAA-I 毕赤酵母分泌型表达载体的构建 | 第30-33页 |
| ·VAA-I 在毕赤酵母中的分泌表达[70] | 第33-35页 |
| ·表达产物分析 | 第35-38页 |
| ·小规模制备 rVAA-I 的纯化工艺研究（ KTApurifier 蛋白纯化工作站） | 第38-39页 |
| ·rVAA-I 质谱分析 | 第39页 |
| ·实验结果 | 第39-46页 |
| ·rVAA-I 基因的优化与合成 | 第39-40页 |
| ·rVAA-I 毕赤酵母分泌型表达载体的构建 | 第40-42页 |
| ·PCR 法筛选阳性转化子 | 第42-43页 |
| ·SDS-PAGE 筛选高表达 rVAA-I 的毕赤酵母工程菌 | 第43-44页 |
| ·rVAA-I 的 Western Blot 分析 | 第44-45页 |
| ·rVAA-I 小量纯化 | 第45-46页 |
| ·质谱测定 rVAA-I 的相对分子质量 | 第46页 |
| ·rVAA-I 的 N-端氨基酸序列分析 | 第46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| 第3章 重组槲寄生凝集素中试规模发酵及纯化工艺研究 | 第48-62页 |
| ·实验材料 | 第48-49页 |
| ·主要菌株 | 第48页 |
| ·主要试剂 | 第48页 |
| ·主要仪器 | 第48-49页 |
| ·主要试剂的配置 | 第49页 |
| ·实验方法 | 第49-55页 |
| ·毕赤酵母表达 rVAA-I 的 pH 值优化 | 第49-50页 |
| ·毕赤酵母中试规模表达 rVAA-I[79] | 第50-52页 |
| ·rVAA-I 大规模纯化系统的建立 | 第52-54页 |
| ·Bradford 法对 rVAA-I 进行定量 | 第54页 |
| ·结果处理及统计分析 | 第54-55页 |
| ·实验结果 | 第55-58页 |
| ·毕赤酵母表达 rVAA-I pH 值的优化 | 第55页 |
| ·rVAA-I 中试规模发酵最佳甲醇诱导时间的确定 | 第55-56页 |
| ·rVAA-I 中试规模发酵时细胞湿重监测结果 | 第56-57页 |
| ·rVAA-I 的大规模纯化 | 第57-58页 |
| ·讨论 | 第58-62页 |
| 第4章 重组槲寄生凝集素抗肝癌作用及机制的实验研究 | 第62-82页 |
| ·实验材料 | 第62-64页 |
| ·细胞株 | 第62页 |
| ·主要试剂 | 第62页 |
| ·主要仪器 | 第62-63页 |
| ·主要试剂的配置 | 第63-64页 |
| ·实验方法 | 第64-70页 |
| ·SMMC7721 细胞的培养[86] | 第64页 |
| ·MTT 比色法测定 rVAA-I 对 SMMC7721 细胞存活率的影响 | 第64-65页 |
| ·流式细胞术检测细胞凋亡 | 第65页 |
| ·透射电镜观察细胞凋亡情况 | 第65-66页 |
| ·Caspase 抑制剂 z-VAD-fmk 对 rVAA-I 诱导细胞凋亡的影响 | 第66页 |
| ·细胞内游离钙离子浓度测定 | 第66页 |
| ·细胞色素 C 释放试验 | 第66页 |
| ·芯片杂交 | 第66-68页 |
| ·实时定量 PCR | 第68-70页 |
| ·PI3-kinase 信号通路对 rVAA-I 抑制 SMMC7721 细胞生长的影响 | 第70页 |
| ·结果处理及统计分析 | 第70页 |
| ·实验结果 | 第70-79页 |
| ·rVAA-I 对 SMMC7721 细胞存活率的影响 | 第70-72页 |
| ·rVAA-I 可以诱导 SMMC7721 细胞凋亡 | 第72-73页 |
| ·rVAA-I 诱导的细胞凋亡与 Caspase 有关 | 第73-74页 |
| ·rVAA-I 可以引起 SMMC7721 细胞内游离钙离子的释放增加 | 第74-75页 |
| ·rVAA-I 可以诱发细胞色素 C 的释放 | 第75页 |
| ·基因芯片分析结果 | 第75-78页 |
| ·qRT-PCR 结果 | 第78页 |
| ·PI3K 信号通路对 rVAA-I 诱导的 SMMC-7721 细胞凋亡的影响 | 第78-79页 |
| ·讨论 | 第79-82页 |
| 第5章 结论 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-91页 |
| 作者简介及在读期间科研成果 | 第91-93页 |
| 致谢 | 第93页 |
