| 中文摘要 | 第1-14页 |
| ABSTRACT | 第14-17页 |
| 英文缩略词表 | 第17-18页 |
| 第一章 前言 | 第18-33页 |
| 1 透明质酸酶 | 第18-23页 |
| ·概述 | 第18-21页 |
| ·临床应用 | 第21-23页 |
| 2 毕赤酵母概述 | 第23-31页 |
| ·常用表达载体及组成 | 第23-25页 |
| ·宿主菌株 | 第25-26页 |
| ·特点 | 第26-27页 |
| ·影响外源蛋白质表达的因素 | 第27-29页 |
| ·应用进展 | 第29-31页 |
| 3 待解决的问题 | 第31-32页 |
| 4 实验流程 | 第32-33页 |
| 第二章 人透明质酸酶PH-20表达载体的构建 | 第33-63页 |
| 1 材料 | 第33-35页 |
| ·菌株及质粒 | 第33页 |
| ·培养基 | 第33页 |
| ·分子生物学试剂 | 第33-34页 |
| ·其他试剂 | 第34-35页 |
| ·仪器设备 | 第35页 |
| 2 实验步骤与方法 | 第35-47页 |
| ·ph-20基因的合成 | 第35-36页 |
| ·pPICZα A-ph20重组表达载体的构建 | 第36-40页 |
| ·表达载体的扩增及鉴定 | 第40-43页 |
| ·电转 | 第43-46页 |
| ·阳性转化子鉴定 | 第46-47页 |
| 3 结果 | 第47-61页 |
| ·ph-20序列全合成 | 第47-53页 |
| ·pPICZα A-ph20重组表达载体的构建 | 第53-55页 |
| ·表达载体的构建及鉴定 | 第55-57页 |
| ·电转 | 第57-60页 |
| ·阳性转化子鉴定 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-63页 |
| 第三章 rhPH-20在毕赤酵母中的表达及工程菌株的筛选 | 第63-78页 |
| 1 材料 | 第63-65页 |
| ·菌株及质粒 | 第63页 |
| ·培养基 | 第63页 |
| ·仪器设备 | 第63页 |
| ·试剂 | 第63-65页 |
| 2 实验方法 | 第65-69页 |
| ·酵母转化子表型鉴定 | 第65-66页 |
| ·多拷贝整合转化子筛选 | 第66-67页 |
| ·高表达菌株的筛选 | 第67-68页 |
| ·工程菌摇瓶表达条件研究 | 第68-69页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE检测 | 第69页 |
| 3 结果与分析 | 第69-76页 |
| ·酵母转化子表型鉴定 | 第69-71页 |
| ·多拷贝整合子筛选 | 第71-72页 |
| ·高表达菌株的筛选 | 第72-73页 |
| ·工程菌摇瓶表达条件研究 | 第73-75页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE检测 | 第75-76页 |
| 4 讨论 | 第76-78页 |
| 第四章 rhPH-20活性测定方法的比较 | 第78-84页 |
| 1 材料 | 第78-79页 |
| ·菌株 | 第78页 |
| ·试剂 | 第78页 |
| ·试剂溶液配制 | 第78-79页 |
| ·仪器 | 第79页 |
| 2 实验方法 | 第79-80页 |
| ·样品处理 | 第79页 |
| ·3种测定酶活性方法 | 第79-80页 |
| ·精密度实验 | 第80页 |
| 3 结果与分析 | 第80-82页 |
| ·3种方法的标准曲线 | 第80-82页 |
| ·精密度试验结果 | 第82页 |
| ·结果分析 | 第82页 |
| 4 讨论 | 第82-84页 |
| 第五章 工程菌发酵条件优化及部分酶学性质研究 | 第84-107页 |
| 1 材料 | 第84-85页 |
| ·菌株 | 第84页 |
| ·培养基 | 第84页 |
| ·试剂溶液配制 | 第84页 |
| ·仪器设备 | 第84-85页 |
| 2 实验步骤与方法 | 第85-90页 |
| ·发酵生产工艺的探索 | 第85-87页 |
| ·发酵液初步纯化 | 第87页 |
| ·rhPH-20部分酶学性质研究 | 第87-88页 |
| ·参数检测与分析方法 | 第88-90页 |
| 3 结果 | 第90-105页 |
| ·发酵生产工艺的建立 | 第90-98页 |
| ·发酵结果分析 | 第98-99页 |
| ·纯化结果 | 第99-102页 |
| ·rhPH-20部分酶学性质研究 | 第102-105页 |
| 4 讨论 | 第105-107页 |
| 总结 | 第107-108页 |
| 附图 | 第108-111页 |
| 参考文献 | 第111-120页 |
| 致谢 | 第120-121页 |
| 在读硕士期间发表的论文 | 第121-122页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第122页 |