J亚群禽白血病病毒gp85基因的克隆表达及初步应用
| 目录 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 縮略词表 | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第9-16页 |
| ·禽白血病病毒病原特性 | 第9-11页 |
| ·禽白血病病毒的生物学特性 | 第9页 |
| ·禽白血病病毒的分类及其亚群 | 第9-10页 |
| ·禽白血病病毒的基因组结构 | 第10-11页 |
| ·禽白血病流行病学特点 | 第11-12页 |
| ·禽白血病病毒的致病性及致病机制 | 第12-13页 |
| ·禽白血病的组织病理学变化 | 第13-14页 |
| ·禽白血病的免疫抑制作用 | 第14页 |
| ·禽白血病的诊断技术 | 第14-15页 |
| ·病毒的分离和鉴定 | 第14页 |
| ·RT-PCR技术 | 第14页 |
| ·荧光定量PCR | 第14-15页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第15页 |
| ·免疫组织化学技术 | 第15页 |
| ·禽白血病的防治及种群净化 | 第15-16页 |
| 2 研究目的与意义 | 第16-17页 |
| 3 材料与方法 | 第17-29页 |
| ·材料 | 第17-20页 |
| ·质粒与细胞 | 第17页 |
| ·试验动物 | 第17页 |
| ·主要试剂和材料 | 第17-18页 |
| ·仪器设备 | 第18页 |
| ·主要溶液和培养基的配制 | 第18-20页 |
| ·方法 | 第20-29页 |
| ·J亚群禽白血病病毒gp85基因的克隆表达 | 第20-24页 |
| ·J亚群禽白血病ELISA抗体检测方法的建立 | 第24-26页 |
| ·J亚群禽白血病病毒gp85蛋白单克隆抗体的制备 | 第26-29页 |
| 4 结果 | 第29-44页 |
| ·gp85基因的克隆表达 | 第29-33页 |
| ·RT-PCR扩增结果 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的构建和鉴定 | 第30页 |
| ·表达菌诱导后表达分析 | 第30-31页 |
| ·重组蛋白的免疫反应性检测 | 第31-32页 |
| ·gp85蛋白特征分析 | 第32页 |
| ·gp85蛋白的纯化 | 第32-33页 |
| ·J亚群禽白血病ELISA抗体检测方法的建立 | 第33-40页 |
| ·gp85蛋白最佳包被浓度和血清最佳稀释度的确定 | 第33-34页 |
| ·最佳包被条件的确定 | 第34页 |
| ·封闭液最佳工作浓度的确定 | 第34页 |
| ·封闭液最佳工作时间的确定 | 第34-35页 |
| ·血清最佳工作时间的确定 | 第35页 |
| ·酶标二抗最佳稀释度的确定 | 第35-36页 |
| ·酶标二抗最佳工作时间的确定 | 第36页 |
| ·最佳显色时间的确定 | 第36页 |
| ·ELISA阴阳性临界值的确定 | 第36-37页 |
| ·重复性试验 | 第37-38页 |
| ·特异性试验 | 第38页 |
| ·敏感性试验 | 第38-39页 |
| ·包被抗原的保存期试验 | 第39-40页 |
| ·符合性试验 | 第40页 |
| ·J亚群禽白血病病毒gp85蛋白单克隆抗体的制备 | 第40-44页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第40-41页 |
| ·杂交瘤细胞上清和腹水抗体效价的测定 | 第41页 |
| ·杂交瘤细胞稳定性鉴定 | 第41页 |
| ·腹水的纯化及浓度测定 | 第41-42页 |
| ·杂交瘤细胞染色体计数 | 第42-43页 |
| ·抗体亚类的鉴定 | 第43页 |
| ·抗原识别表位鉴定 | 第43页 |
| ·Western-blotting鉴定 | 第43-44页 |
| 5 讨论 | 第44-46页 |
| ·J亚群禽白血病ELISA抗体检测方法的建立 | 第44-45页 |
| ·J亚群禽白血病ELISA抗体检测方法的临床应用 | 第45页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选 | 第45页 |
| ·单克隆抗体的应用 | 第45-46页 |
| 6 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 致谢 | 第52页 |
