| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 英文缩写表 | 第10-11页 |
| 第一章 DNA错配修复机理研究进展 | 第11-31页 |
| ·简介 | 第11-12页 |
| ·DNA复制、基因突变和错配修复 | 第11-12页 |
| ·错配修复的生物学意义 | 第12页 |
| ·大肠杆菌中甲基化介导的错配修复系统 | 第12-15页 |
| ·大肠杆菌错配修复系统的组成 | 第12-13页 |
| ·大肠杆菌甲基化介导的错配修复 | 第13-15页 |
| ·真核生物的错配修复 | 第15-21页 |
| ·真核生物MutS和MutL的功能 | 第16-17页 |
| ·真核生物中错配修复途径的其它成分 | 第17-18页 |
| ·由纯化蛋白组建的真核生物中错配引起的切除系统 | 第18-21页 |
| ·MutS蛋白和MutL蛋白的结构 | 第21-23页 |
| ·错配修复过程中DNA上不同位置分子事件的偶联 | 第23-26页 |
| ·错配修复的其它生物学功能 | 第26-30页 |
| ·错配修复蛋白在DNA烷基化损伤中的作用 | 第26-28页 |
| ·错配修复蛋白在抗体分化中的作用 | 第28-30页 |
| ·本课题的研究意义和目的 | 第30-31页 |
| 第二章 BIAcore技术及其在生命科学中的应用 | 第31-37页 |
| ·BIAcore技术简介 | 第31-32页 |
| ·蛋白质组学 | 第32-33页 |
| ·信号转导 | 第33-34页 |
| ·新药开发 | 第34-36页 |
| ·前景展望 | 第36-37页 |
| 第三章 大肠杆菌错配修复蛋白MutL和DNA聚合酶Ⅲ clamp loader的相互作用 | 第37-62页 |
| ·前言 | 第37-39页 |
| ·材料与方法 | 第39-49页 |
| ·实验材料 | 第39-42页 |
| ·实验方法 | 第42-49页 |
| ·结果与分析 | 第49-59页 |
| ·holA,holB,dnaX,mutlsbp等基因的克隆和蛋白的表达纯化 | 第49-51页 |
| ·Clamp loader的组装 | 第51页 |
| ·MutL系列缺失突变体的构建和纯化 | 第51-52页 |
| ·MutL-SBP能够弥补mutl基因缺陷的大肠杆菌 | 第52-53页 |
| ·Far western分析MutL和Clamp loader之间的相互作用 | 第53-54页 |
| ·SPR确定和量化了新发现的蛋白质间的相互作用 | 第54-56页 |
| ·MutL和δ,γ和clamp loader之间的相互作用受到ATP的调控 | 第56-57页 |
| ·不同的MutL缺失突变体和聚合酶clamp loader亚基之间的相互作用 | 第57-59页 |
| ·讨论 | 第59-62页 |
| 第四章 大肠杆菌MutS,MutL蛋白和β clamp相互作用的分子机制和功能研究 | 第62-93页 |
| ·前言 | 第62-65页 |
| ·材料与方法 | 第65-75页 |
| ·实验材料 | 第65-68页 |
| ·实验方法 | 第68-75页 |
| ·结果与分析 | 第75-91页 |
| ·大肠杆菌MutS蛋白突变体的构建 | 第75页 |
| ·从大肠杆菌基因组中扩增β clamp | 第75-76页 |
| ·β-clamp和β-clampSBP的表达纯化 | 第76-77页 |
| ·MutS突变体蛋白的表达纯化 | 第77页 |
| ·原子力显微镜观察β clamp | 第77-78页 |
| ·β clamp阻止MutS结合错配 | 第78-80页 |
| ·β-clamp和MutS之间的相互作用受到ATP的调控 | 第80-81页 |
| ·β-clamp不能结合MutS-DNA符合物 | 第81-82页 |
| ·MutS和β-clamp相互作用的Motif和关键氨基酸 | 第82-83页 |
| ·所有的MutS突变体都和野生型一样能和MutL相互作用 | 第83页 |
| ·MutSC △812-815能够完全互补MutS缺陷的大肠杆菌,但是在2-AP的存在显示出了突变型特征 | 第83-85页 |
| ·MutS~N△15-19不能恢复大肠杆菌mutS缺陷菌株的错配修复功能,表现为缺陷型 | 第85-86页 |
| ·MutS~N △15-19的圆二色谱分析 | 第86-87页 |
| ·MutS~N △15-19结合错配DNA能力和ATPase活性分析 | 第87-89页 |
| ·MutL能够直接与β-clamp相互作用 | 第89页 |
| ·β-clamp能够和MutL相互作用并且阻止MutL去结合ssDNA | 第89-91页 |
| ·讨论 | 第91-93页 |
| 第五章 大肠杆菌错配修复蛋白MutL结合DNA以及不同DNA错配结合蛋白的初步研究 | 第93-110页 |
| ·前言 | 第93-95页 |
| ·材料与方法 | 第95-103页 |
| ·实验材料 | 第95-97页 |
| ·实验方法 | 第97-103页 |
| ·结果与分析 | 第103-109页 |
| ·菌体PCR扩增大肠杆菌mutM基因 | 第103页 |
| ·人源p53基因的扩增 | 第103-104页 |
| ·人源p53的表达和纯化 | 第104页 |
| ·不同MutL突变体蛋白的纯化 | 第104-105页 |
| ·p53与不同错配DNA的结合 | 第105-106页 |
| ·MutM与不同错配DNA的结合 | 第106-107页 |
| ·MutL与3'overhang DNA,5'overhang DNA以及ssDNA的结合 | 第107-109页 |
| ·讨论 | 第109-110页 |
| 参考文献 | 第110-122页 |
| 致谢 | 第122-123页 |
| 附录 | 第123页 |
