| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-39页 |
| 第一章 单核细胞增多性李斯特菌主要表面蛋白 | 第15-25页 |
| 1. 共价结合到细菌细胞壁上的蛋白 | 第15-19页 |
| ·含有LPXTG基序的蛋白 | 第15-16页 |
| ·含有LRR区的蛋白质 | 第16-18页 |
| ·内化素A | 第17页 |
| ·内化素B | 第17-18页 |
| ·内化素C | 第18页 |
| ·含有PKD重复序列的蛋白 | 第18页 |
| ·含有GRD基序的蛋白 | 第18页 |
| ·分拣酶 | 第18-19页 |
| 2. 非共价结合到细胞壁上的蛋白 | 第19-20页 |
| ·与磷壁酸相互作用的GW蛋白 | 第19-20页 |
| ·含有疏水尾的蛋白 | 第20页 |
| ·p60样蛋白 | 第20页 |
| 3. 脂蛋白 | 第20-21页 |
| 4. 小结 | 第21-22页 |
| 参考文献 | 第22-25页 |
| 第二章 肽核酸及在微生物诊断领域的研究进展 | 第25-39页 |
| 1. 肽核酸的结构与性质 | 第25-29页 |
| ·PNA的结构 | 第25-26页 |
| ·肽核酸的理化性质 | 第26-27页 |
| ·肽核酸的生物学特性 | 第27-29页 |
| ·生物稳定性 | 第27页 |
| ·杂交特性 | 第27-28页 |
| ·PNA与DNA、RNA的杂交模式及分子机制 | 第28-29页 |
| 2. 肽核酸技术 | 第29-31页 |
| ·肽核酸探针 | 第29-30页 |
| ·自身报告的PNA探针 | 第30页 |
| ·Q-PNA PCR | 第30页 |
| ·肽核酸阻断探针 | 第30-31页 |
| ·荧光原位杂交技术 | 第31页 |
| 3. 肽核酸在微生物诊断领域的应用 | 第31-34页 |
| ·直接检测和鉴定 | 第31-32页 |
| ·PNA-FISH直接检测微生物 | 第31-32页 |
| ·改良PCR | 第32页 |
| ·培养增菌后鉴定 | 第32-34页 |
| ·增菌后鉴定及计数 | 第32页 |
| ·基于玻片的固相PNA FISH | 第32-33页 |
| ·液相PNA FISH | 第33-34页 |
| 参考文献 | 第34-39页 |
| 第二部分 实验研究 | 第39-82页 |
| 第三章 单核细胞增多性李斯特菌LMO1847蛋白的原核表达及多抗的制备 | 第40-52页 |
| 1. 材料与方法 | 第40-49页 |
| ·材料 | 第40-41页 |
| ·菌株、载体与试验动物 | 第40-41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·引物设计 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-49页 |
| ·LMO1847目的基因片段的PCR扩增 | 第41-42页 |
| ·扩增产物的纯化 | 第42页 |
| ·重组质粒pET30a-LMO1847的构建 | 第42-44页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的表达 | 第44-46页 |
| ·表达蛋白纯化及浓度测定 | 第46-48页 |
| ·多克隆抗体制备 | 第48-49页 |
| 2. 结果 | 第49-50页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第49页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第49页 |
| ·目的基因表达产物的SDS-PAGE检测 | 第49-50页 |
| ·蛋白纯化及多克隆抗体的制备 | 第50页 |
| 3. 讨论 | 第50-52页 |
| 第四章 单增李斯特菌LMO1847的抗原性分析及在不同应激条件下的表达 | 第52-61页 |
| 1. 材料与方法 | 第53-56页 |
| ·材料 | 第53页 |
| ·菌株及培养基 | 第53页 |
| ·主要试剂、抗体及仪器 | 第53页 |
| ·方法 | 第53-56页 |
| ·LMO1847蛋白的免疫反应性分析 | 第53-54页 |
| ·LMO1847抗体与李斯特菌属及其他属细菌的交叉反应性分析 | 第54-55页 |
| ·单增李斯特菌在应激条件下外膜蛋白LMO1847的表达 | 第55-56页 |
| 2. 结果 | 第56-59页 |
| ·ELISA分析蛋白LMO1847的免疫反应性 | 第56页 |
| ·Western-blotting分析LMO1847的免疫反应性 | 第56-57页 |
| ·DOT-ELISA分析LMO1847抗体与李斯特菌属内外细菌的交叉反应性 | 第57页 |
| ·单增李斯特菌外膜蛋白LMO1847在应激条件下的表达情况 | 第57-59页 |
| 3. 讨论 | 第59-61页 |
| 第五章 单增李斯特菌肽核酸荧光原位杂交检测技术研究 | 第61-79页 |
| 1. 材料与方法 | 第62-67页 |
| ·材料 | 第62-63页 |
| ·化学试剂 | 第62页 |
| ·菌株 | 第62页 |
| ·培养基及缓冲液 | 第62-63页 |
| ·方法 | 第63-67页 |
| ·靶基因的选择及序列分析 | 第63-64页 |
| ·PNA探针的设计与合成 | 第64-65页 |
| ·PNA液相荧光原位杂交 | 第65-66页 |
| ·PNA固相荧光原位杂交 | 第66-67页 |
| 2. 结果 | 第67-77页 |
| ·李斯特菌属23S rDNA分析 | 第67-70页 |
| ·李斯特菌属各种间23S rDNA同源性分析 | 第67-68页 |
| ·李斯特菌属23S rDNA变异区分布情况 | 第68-70页 |
| ·探针的选择及合成 | 第70页 |
| ·液相杂交 | 第70-72页 |
| ·液相杂交条件的优化 | 第70-71页 |
| ·液相杂交对李斯特菌属及属外细菌的检测 | 第71-72页 |
| ·固相杂交 | 第72-77页 |
| ·固相杂交条件的优化 | 第72-74页 |
| ·固相杂交对李斯特菌属及属外细菌的检测 | 第74-77页 |
| 3. 讨论 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-82页 |
| 结论与建议 | 第82-83页 |
| 附录:常用试剂及配制 | 第83-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
