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HECT类泛素连接酶Smurf1的Neddylation修饰研究

摘要第1-5页
Abstract第5-11页
第1章 引言第11-20页
   ·Neddylation 修饰系统概述第11-15页
     ·Neddylation 修饰的级联酶促反应第11-13页
     ·Neddylation 修饰中的 E3 和底物第13-15页
   ·HECT 类泛素连接酶 Smurf1 的主要功能及其调控机制第15-19页
     ·Nedd4 泛素连接酶家族简介第15-16页
     ·Smurf1 的主要功能第16-18页
     ·Smurf1 连接酶的主要调控制第18-19页
   ·本论文的研究目的第19-20页
第2章 实验材料与方法第20-25页
   ·试剂第20-21页
     ·免疫印迹相关试剂第20页
     ·细胞裂解相关试剂第20页
     ·细胞培养相关试剂第20-21页
     ·抗体及药品第21页
   ·质粒第21页
   ·细胞培养第21-22页
   ·细胞转染第22页
   ·免疫印迹第22页
   ·免疫共沉淀第22页
   ·报告基因实验第22-23页
   ·实时定量 PCR第23页
   ·GST pull-down 实验第23页
   ·体内修饰实验第23页
   ·体外修饰实验第23-24页
   ·间接免疫荧光第24页
   ·流式细胞术第24-25页
第3章 泛素连接酶 Smurf1 的 Neddylation 修饰及调控功能第25-45页
   ·Nedd8 和 Smurf1 相互作用第25-27页
   ·Nedd8 调控 Smurf1 的稳定性和泛素连接酶活性第27-29页
     ·Nedd8 对 Smurf1 蛋白水平的调控第27页
     ·Nedd8 增强 Smurf1 自我泛素化修饰对其底物的影响第27-29页
   ·Nedd8 通过 Neddylation 修饰调控 Smurf1 的稳定性和 E3 活性第29-31页
     ·Neddylation 修饰调控 Smurf1 的稳定性第29-31页
     ·Neddylation 修饰增强 Smurf1 的 E3 活性第31页
   ·Smurf1 能够被 Nedd8 进行 Neddylation 修饰第31-35页
     ·Smurf1 在细胞内可以被 Neddylation 修饰第31-33页
     ·Smurf1 在体外能够自我催化 Neddylation 修饰第33-35页
   ·Smurf1 是一个新的 HECT 类 Neddylation 修饰 E325第35-38页
     ·Smurf1 与 Neddylation E2 直接相互作用第35-37页
     ·Smurf1 存在 Neddylation 修饰酶活中心第37-38页
   ·Nedd8 通过 Neddylation 修饰 Smurf2 的稳定性和泛素连接酶活性第38-41页
   ·小结第41-42页
   ·讨论第42-45页
第4章 泛素连接酶 Smurf1 促进转录因子 KLF2 的泛素化降解第45-53页
   ·在肺癌细胞 H1299 中 Smurf1 促进 KLF2 蛋白的泛素-蛋白酶体降解第46-48页
   ·在肺癌细胞 H1299 中 Smurf1 和 KLF2 存在相互作用第48页
   ·Smurf1 降解 KLF2 而影响其转录活性第48-51页
   ·小结第51页
   ·讨论第51-53页
第5章 ATM磷酸化修饰微管结合蛋白NuSAP参与M期调控第53-62页
   ·过表达 NuSAP 造成 G2/M 期阻滞依赖于 ATM 的存在第54页
   ·ATM 磷酸化修饰 NuSAP S124 位点造成 G2/M 期阻滞第54-58页
   ·ATM 磷酸化修饰 NuSAP 发生于 M 期第58页
   ·ATM 在 M 期结合 NuSAP第58-59页
   ·小结第59-60页
   ·讨论第60-62页
第6章 泛素连接酶 RBBP6 对 BTB 家族成员 ZBTB38 的降解及在细胞周期调控中的功能第62-69页
   ·RBBP6 与 ZBTB38 相互作用第63-65页
   ·RBBP6 泛素化修饰 ZBTB3855第65-67页
   ·讨论第67-69页
第7章 结论第69-73页
参考文献第73-83页
致谢第83-85页
附录 A 实时定量 PCR 所需引物第85-86页
附录 B 质粒构建的相关信息第86-91页
个人简历、在学期间发表的学术论文和研究成果第91页

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