蜜蜂球囊菌cDNA文库的构建及胞外酶的定性研究
| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-23页 |
| 1 蜜蜂白垩病研究进展 | 第11-15页 |
| ·病原学研究进展 | 第11-12页 |
| ·培养条件的研究 | 第12页 |
| ·流行病学的研究进展 | 第12-14页 |
| ·病情诊断 | 第12-13页 |
| ·发病规律的研究 | 第13页 |
| ·疾病的传播 | 第13-14页 |
| ·白垩病预防与疾病防治研究进展 | 第14-15页 |
| ·加强蜜蜂检疫 | 第14页 |
| ·加强饲养管理 | 第14页 |
| ·抗病育种 | 第14页 |
| ·药物治疗方面的研究 | 第14-15页 |
| 2 昆虫围食膜(PM)的研究进展 | 第15-22页 |
| ·PM的发现 | 第16页 |
| ·PM的形成 | 第16-17页 |
| ·PM的组成成分 | 第17-19页 |
| ·几丁质 | 第17页 |
| ·PM蛋白成分 | 第17-19页 |
| ·PM的结构 | 第19-20页 |
| ·PM的功能 | 第20-22页 |
| ·物理保护和外源物入侵的屏障 | 第20页 |
| ·化学保护PM | 第20页 |
| ·选择性通透性 | 第20-21页 |
| ·中肠腔的区室化用 | 第21-22页 |
| 3 研究目的与意义 | 第22-23页 |
| 第二部分 蜜蜂球囊菌cDNA文库的构建 | 第23-38页 |
| 1 试验材料 | 第23-25页 |
| ·试验菌种 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23-24页 |
| ·主要溶液配制 | 第24-25页 |
| 2 试验方法与步骤 | 第25-34页 |
| ·菌种的培养 | 第25-26页 |
| ·马铃薯酵母培养基(PDA)的配制 | 第25页 |
| ·菌株的培养和纯化 | 第25-26页 |
| ·蜜蜂球囊菌总RNA的提取 | 第26页 |
| ·mRNA试剂盒的分离纯化 | 第26-27页 |
| ·准备工作 | 第26页 |
| ·分离纯化 | 第26-27页 |
| ·cDNA文库的构建 | 第27-32页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第27页 |
| ·cDNA第二链的合成 | 第27-28页 |
| ·cDNA末端钝化 | 第28-29页 |
| ·连接EcoR I接头 | 第29页 |
| ·EcoR I末端磷酸化 | 第29页 |
| ·Xho I消化 | 第29-30页 |
| ·cDNA不同大小片段的分离 | 第30-31页 |
| ·文库的包装 | 第31-32页 |
| ·文库滴度测定 | 第32页 |
| ·文库的体外切割 | 第32-33页 |
| ·小量质粒提取 | 第33-34页 |
| ·PCR方法鉴定插入片断大小 | 第34页 |
| 3 结果 | 第34-37页 |
| ·蜜蜂球囊菌的总RNA质量鉴定与cDNA定量 | 第34-35页 |
| ·cDNA文库的分级分离 | 第35页 |
| ·cDNA文库滴度 | 第35-36页 |
| ·质粒及PCR检测结果 | 第36-37页 |
| 4 小结 | 第37-38页 |
| 第三部分 蜜蜂球囊菌胞外酶的定性研究 | 第38-54页 |
| 1 试验材料 | 第39-41页 |
| ·菌株 | 第39页 |
| ·主要试剂与配制 | 第39-41页 |
| ·主要试剂 | 第39页 |
| ·试剂配制 | 第39-40页 |
| ·仪器 | 第40-41页 |
| 2 试验方法 | 第41-47页 |
| ·菌种的培养 | 第41-42页 |
| ·马铃薯酵母培养基的配制 | 第41页 |
| ·液体合成培养基配制 | 第41页 |
| ·菌株的培养和纯化 | 第41-42页 |
| ·粗酶液的制备与浓缩 | 第42页 |
| ·粗酶液的制备 | 第42页 |
| ·粗酶液的浓缩 | 第42页 |
| ·胶体几丁质制备 | 第42页 |
| ·SDS-PAGE和PAGE配制 | 第42-44页 |
| ·分离胶的配制步骤 | 第42-43页 |
| ·浓缩胶的配制步骤 | 第43-44页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第44-45页 |
| ·胞外酶的鉴定 | 第45-46页 |
| ·蛋白酶染色 | 第45页 |
| ·酯酶活性染色 | 第45-46页 |
| ·淀粉酶活性染色 | 第46页 |
| ·结合试验步骤 | 第46页 |
| ·银染色步骤 | 第46-47页 |
| ·考马斯亮蓝染色步骤 | 第47页 |
| 3 结果 | 第47-53页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第47页 |
| ·蜜蜂球囊菌胞外蛋白酶、酯酶和淀粉酶的鉴定 | 第47-50页 |
| ·蜜蜂球囊菌的胞外分泌物 | 第47-49页 |
| ·蜜蜂球囊菌的菌体 | 第49-50页 |
| ·凡丁质结合蛋白实验 | 第50-53页 |
| ·Loading buffer处理样品 | 第50-51页 |
| ·荧光增白剂CalcofluorM2R处理样品 | 第51-53页 |
| 4 小结 | 第53-54页 |
| 第四部分 讨论 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 附录 | 第66-67页 |
