| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 第一章 绪言 | 第15-34页 |
| ·羊痘病毒的研究进展 | 第15-24页 |
| ·羊痘病的流行概况 | 第15页 |
| ·羊痘病毒的基本特征 | 第15-16页 |
| ·羊痘病毒基因组结构 | 第16-17页 |
| ·羊痘病毒重要基因、蛋白研究 | 第17-19页 |
| ·羊痘诊断技术研究进展 | 第19-21页 |
| ·羊痘病毒与宿主免疫系统相互关系研究 | 第21-22页 |
| ·羊痘疫苗研究进展 | 第22-24页 |
| ·口蹄疫病毒基因组结构概述及活载体疫苗研究进展 | 第24-28页 |
| ·FMDV基因组结构概述 | 第24-27页 |
| ·FMDV活载体疫苗研究进展 | 第27-28页 |
| ·疫苗研究中应用的载体病毒 | 第28-32页 |
| ·痘病毒 | 第28-29页 |
| ·腺病毒 | 第29-30页 |
| ·甲病毒 | 第30-31页 |
| ·脊髓灰质炎病毒 | 第31页 |
| ·疱疹病毒 | 第31-32页 |
| ·其它病毒 | 第32页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第32-34页 |
| 第二章 山羊痘病毒AV41株胸苷激酶基因及侧翼片段的克隆和序列分析 | 第34-44页 |
| ·材料 | 第34-35页 |
| ·质粒载体与宿主菌 | 第34页 |
| ·毒株与细胞 | 第34页 |
| ·主要试剂与设备 | 第34-35页 |
| ·引物 | 第35页 |
| ·方法 | 第35-38页 |
| ·GTPV的增殖 | 第35页 |
| ·GTPV基因组DNA的提取 | 第35页 |
| ·PCR扩增 | 第35-36页 |
| ·目的DNA片段的纯化回收 | 第36页 |
| ·扩增片段与T载体的连接 | 第36页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第36页 |
| ·连接产物的转化 | 第36-37页 |
| ·重组质粒提取 | 第37页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第37-38页 |
| ·结果 | 第38-43页 |
| ·目的基因PCR扩增产物 | 第38页 |
| ·重组质粒酶切鉴定和PCR鉴定 | 第38-40页 |
| ·重组质粒序列分析 | 第40页 |
| ·氨基酸序列比较 | 第40-42页 |
| ·同源性分析与遗传进化树构建 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43-44页 |
| 第三章 含Asia 1型FMDV P1-2A、3C基因和EGFP基因表达盒的构建 | 第44-53页 |
| ·材料 | 第44-45页 |
| ·菌株与载体 | 第44页 |
| ·主要试剂 | 第44页 |
| ·仪器和设备 | 第44-45页 |
| ·方法 | 第45-49页 |
| ·FMDV P12A、3C基因的获得 | 第45-47页 |
| ·痘苗病毒启动子与荧光蛋白(EGFP)筛选基因获得 | 第47-49页 |
| ·整体表达盒的构建 | 第49页 |
| ·结果 | 第49-50页 |
| ·FMDV P12A、3C基因的获得鉴定 | 第49-50页 |
| ·痘苗启动子P7.5基因与荧光蛋白(EGFP)筛选基因获得与鉴定 | 第50页 |
| ·整体表达盒的构建 | 第50页 |
| ·讨论 | 第50-53页 |
| 第四章 含外源基因的转移载体的构建 | 第53-60页 |
| ·材料 | 第53页 |
| ·菌株与载体 | 第53页 |
| ·主要试剂 | 第53页 |
| ·仪器和设备 | 第53页 |
| ·方法 | 第53-56页 |
| ·转移载体骨架的构建及鉴定 | 第53-54页 |
| ·含FMDV P1-2A、3C及EGFP基因的山羊痘病毒转移载体的构建 | 第54-56页 |
| ·结果 | 第56-59页 |
| ·转移载体骨架鉴定 | 第56-57页 |
| ·共表达FMDV P12A3C及EGFP基因的山羊痘病毒转移载体的构建鉴定 | 第57-59页 |
| ·讨论 | 第59-60页 |
| 第五章 表达Asia 1型FMDV P1-2A和3C基因的GTPV弱毒株构建与鉴定 | 第60-71页 |
| ·材料与方法 | 第60-63页 |
| ·毒株和细胞 | 第60页 |
| ·细胞培养用品、试剂 | 第60页 |
| ·GTPV AV41株适应细胞传代 | 第60-61页 |
| ·GTPV AV41与脂质体共转染BHK-21细胞 | 第61页 |
| ·重组病毒的筛选和纯化 | 第61页 |
| ·重组病毒的提纯与电镜观察 | 第61-62页 |
| ·RT-PCR检测目的基因 | 第62页 |
| ·抗原捕获ELISA检测目的蛋白 | 第62-63页 |
| ·重组病毒的遗传稳定性试验 | 第63页 |
| ·有限稀释法测定重组GTPV毒价 | 第63页 |
| ·实验动物免疫 | 第63页 |
| ·结果 | 第63-69页 |
| ·羊痘病毒感染BHK-21细胞后的病变图 | 第63-64页 |
| ·绿色荧光标签筛毒 | 第64-66页 |
| ·提纯后羊痘病毒的电镜照片 | 第66页 |
| ·RT-PCR鉴定 | 第66-67页 |
| ·抗原捕获ELISA检测 | 第67页 |
| ·重组GTPV毒价测定 | 第67-68页 |
| ·重组GTPV的遗传稳定性试验 | 第68页 |
| ·血清抗体检测结果 | 第68-69页 |
| ·讨论 | 第69-71页 |
| 第六章 GTPV AV41株复制非必需区筛选及表达LacZ基因的突变株的构建 | 第71-84页 |
| ·材料 | 第71-72页 |
| ·病毒与细胞 | 第71页 |
| ·菌种、载体 | 第71页 |
| ·主要试剂 | 第71-72页 |
| ·主要仪器、设备 | 第72页 |
| ·方法 | 第72-78页 |
| ·GTPV的增殖 | 第72页 |
| ·GTPV基因组DNA的提取 | 第72页 |
| ·GTPV AV41毒株部分HindⅢ片段的克隆和鉴定 | 第72-75页 |
| ·GTPV复制非必需片段的筛选 | 第75-78页 |
| ·重组病毒遗传稳定性试验 | 第78页 |
| ·结果 | 第78-81页 |
| ·病毒基因组的提取和鉴定 | 第78页 |
| ·重组质粒鉴定 | 第78-79页 |
| ·P_(7.5)-P_(7.5)-LacZ基因框的获得 | 第79-80页 |
| ·含有P_(7.5)-P_(7.5)-LacZ基因框的重组载体质粒的获得 | 第80页 |
| ·CPV复制非必需片段的筛选 | 第80-81页 |
| ·复制非必需区的遗传稳定性试验 | 第81页 |
| ·讨论 | 第81-84页 |
| 第七章 结论 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-96页 |
| 附录 | 第96-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
| 作者简历 | 第105页 |
