| 摘要 | 第1-3页 |
| Summary | 第3-9页 |
| 前言 | 第9-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-33页 |
| 口蹄疫诊断技术及其亚单位疫苗的研究进展 | 第11-33页 |
| 1 FMDV 基因组结构概述 | 第11-12页 |
| 2 FMDV 基因组VPg、非转录区、Poly(A)尾巴及功能 | 第12-13页 |
| ·5'非转录区 | 第12-13页 |
| ·Poly（C） | 第12页 |
| ·IRES | 第12-13页 |
| ·3'非转录区 | 第13页 |
| ·Poly（A）尾巴 | 第13页 |
| 3 FMDV 结构蛋白及其功能 | 第13-15页 |
| ·病毒构成 | 第13-14页 |
| ·结构蛋白型间差异 | 第14页 |
| ·宿主识别位点 | 第14页 |
| ·抗原位点 | 第14-15页 |
| 4 FMD 诊断技术研究进展 | 第15-23页 |
| ·病原学诊断 | 第15页 |
| ·血清学检测 | 第15-17页 |
| ·补体结合试验 | 第16页 |
| ·病毒中和试验 | 第16页 |
| ·免疫扩散沉淀试验 | 第16-17页 |
| ·间接血凝试验（IHA） | 第17页 |
| ·酶联免疫吸附试验（ELISA） | 第17页 |
| ·分子生物学诊断方法 | 第17-21页 |
| ·RT-PCR 技术 | 第18页 |
| ·实时荧光定量PCR 技术（real-time Q-PCR 技术） | 第18-19页 |
| ·原位杂交技术（ISH） | 第19-20页 |
| ·电聚焦技术 | 第20页 |
| ·核酸序列分析 | 第20-21页 |
| ·FMDV 感染与免疫鉴别诊断研究现状 | 第21-22页 |
| ·其他诊断方法 | 第22页 |
| ·结语 | 第22-23页 |
| 5 FMDV 重组蛋白亚单位疫苗研究进展 | 第23-27页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第23-24页 |
| ·酵母表达系统 | 第24-25页 |
| ·昆虫细胞表达系统 | 第25页 |
| ·哺乳动物细胞表达系统 | 第25-26页 |
| ·转基因植物表达系统 | 第26-27页 |
| ·结语 | 第27页 |
| 参考文献 | 第27-33页 |
| 第二部分 研究报告 | 第33-53页 |
| 实验一口蹄疫病毒结构蛋白基因VP1、VP1 C 末端和牛IFN-α基因在大肠杆菌中的表达及纯化 | 第33-41页 |
| 1 材料与方法 | 第33-37页 |
| ·材料 | 第33页 |
| ·菌种和质粒 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33页 |
| ·主要仪器与设备 | 第33页 |
| ·方法 | 第33-37页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第33-34页 |
| ·质粒转化 | 第34页 |
| ·重组表达质粒的诱导表达 | 第34页 |
| ·大量诱导 | 第34页 |
| ·SDS-PAGE 分析 | 第34-35页 |
| ·Western blot 鉴定分析 | 第35页 |
| ·溶解性判定试验 | 第35页 |
| ·重组目的蛋白的纯化 | 第35-37页 |
| 2 结果 | 第37-39页 |
| ·表达产物的鉴定 | 第37-38页 |
| ·表达产物的纯化 | 第38-39页 |
| ·Western blot 分析结果 | 第39页 |
| 3 讨论 | 第39-41页 |
| 实验二重组牛IFN-α对亚洲Ⅰ型口蹄疫亚单位疫苗免疫效果的影响研究 | 第41-46页 |
| 1 材料与方法 | 第41-42页 |
| ·材料 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·实验动物 | 第41页 |
| ·主要仪器与设备 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-42页 |
| ·牛IFN-α、VP1 基因和VP1 C 末端基因的表达、纯化与复性 | 第41-42页 |
| ·动物免疫和口蹄疫抗体检测 | 第42页 |
| ·T 细胞分离和T 淋巴细胞增殖试验 | 第42页 |
| 2 结果 | 第42-44页 |
| ·目的蛋白的纯化与复性 | 第42页 |
| ·小鼠免疫后的抗体水平变化 | 第42-43页 |
| ·T 淋巴细胞增殖反应 | 第43-44页 |
| 3 讨论 | 第44-46页 |
| 实验三猪口蹄疫病毒VP1 结构蛋白抗体间接ELISA 方法的建立 | 第46-53页 |
| 1 材料与方法 | 第46-48页 |
| ·材料 | 第46页 |
| ·菌种和质粒 | 第46页 |
| ·主要试剂和血清 | 第46页 |
| ·主要仪器与设备 | 第46页 |
| ·方法 | 第46-48页 |
| ·VP1 蛋白的获得与纯化 | 第46页 |
| ·最佳包被度和最佳血清稀释度的确定(方阵滴定) | 第46-47页 |
| ·抗原最佳包被条件的确定 | 第47页 |
| ·酶标二抗最佳工作浓度的确定 | 第47页 |
| ·ELISA 方法初步建立 | 第47页 |
| ·ELISA 阴阳性临界值的确定 | 第47页 |
| ·特异性试验 | 第47页 |
| ·敏感性试验 | 第47页 |
| ·重复性试验 | 第47-48页 |
| ·用VP1-ELISA 检测待测血清（对比试验） | 第48页 |
| 2 结果 | 第48-51页 |
| ·最佳包被度和最佳血清稀释度的确定(方阵滴定) | 第48页 |
| ·抗原最佳包被条件的确定结果 | 第48-49页 |
| ·酶标二抗最佳工作浓度的确定结果 | 第49页 |
| ·VP1-ELISA 阴阳界限的确定结果 | 第49-50页 |
| ·特异性试验 | 第50页 |
| ·敏感性试验 | 第50页 |
| ·重复性试验结果 | 第50-51页 |
| ·对比试验结果 | 第51页 |
| 3 讨论 | 第51-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-57页 |
| 作者简介 | 第57-58页 |
| 导师简介 | 第58-60页 |
