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PKS5和互作分子伴侣DnaJ在ABA信号系统中的功能分析

摘要第1-5页
Abstract第5-11页
第一部分 文献综述第11-39页
 前言第11-12页
 第一章 ABA 与植物非生物胁迫第12-22页
  1 ABA 的功能第12页
  2.ABA 的感应-ABA 受体第12-15页
   ·FCA 受体第13-14页
   ·ABAR/CHLH第14页
   ·G 蛋白偶联受体2(GCR2)第14-15页
  3 植物ABA 早期信号介导元件第15-17页
   ·G 蛋白第15页
   ·第二信使第15-16页
   ·磷酸化级联第16-17页
  4 ABA 信号系统中重要组分的鉴定第17-19页
   ·ABA 缺失或应答突变基因的筛选第17-18页
   ·ABA 信号传递中转录调控元件的鉴定第18-19页
  5 ABA 调控胁迫基因的表达分析第19-20页
   ·ABA 依赖的胁迫基因表达第19页
   ·ABA 不依赖的胁迫基因表达第19-20页
  6 ABA 与其它信号的相互作用第20-21页
  7 ABA 信号元件通过265 蛋白酶体系降解第21页
  8 ABA 在成熟种子萌发中的作用第21-22页
 第二章 植物中SCaBP 家族与PKS 家族的作用第22-30页
  1 植物抗盐的SOS 途径第22-24页
  2 SCaBP 家族第24-26页
   ·SCaBP 家族在植物抗逆中的作用第25页
   ·SCaBPs 的差异表达模式第25-26页
  3 PKS 家族第26-28页
   ·PKSes 激活及其生化特征第26-27页
   ·PKS 与蛋白磷酸酶之间的相互作用第27页
   ·PKSes 的差异表达模式第27-28页
  4 SCaBPs 与PKSes 特异性互作及功能分析第28-30页
   ·SCaBP 与PKS 之间互作的选择性分析第28页
   ·SCaBP 与PKS 不同成员间的互作对植物应答胁迫的意义第28-30页
 第三章 分子伴侣在植物抗逆中的作用第30-39页
  1 分子伴侣的定义、分类和功能第30-32页
   ·分子伴侣的定义第30页
   ·分子伴侣的分类第30-31页
   ·植物中分子伴侣的功能第31-32页
  2 Hsp70 家族的研究进展第32-34页
  3 J 蛋白的研究进展第34-39页
   ·J 蛋白的结构、多样性及分类第34-35页
   ·J 蛋白的生理功能第35-36页
   ·J 蛋白参与信号转导过程第36-37页
   ·拟南芥中J蛋白研究第37-39页
第二部分 研究论文第39-55页
 前言第39页
 1 材料第39-44页
   ·植物材料第39-40页
   ·菌株与质粒第40页
   ·酵母、大肠杆菌、植物和原生质体表达载体的构建第40-41页
   ·有关仪器第41页
   ·引物合成与DNA 片段测序第41页
   ·药品和试剂配制第41-42页
   ·相关试剂配制方法第42-44页
 2 实验方法第44-55页
   ·拟南芥的培养第44页
   ·T-DNA 插入突变体的鉴定第44-45页
     ·小量提取基因组DNA第44页
     ·PCR 鉴定T-DNA 插入突变体的遗传背景第44页
     ·Tilling 突变体的纯合鉴定第44-45页
   ·酵母双杂交(Y2H)实验的方法第45-49页
     ·Bait 蛋白自激活的检测第46页
     ·高效转化酵母的方法第46-47页
     ·酵母质粒的提取第47-48页
     ·阳性克隆的筛选和鉴定第48页
     ·滤纸印迹法检测报告基因的表达(Colony-lift Filter Assay)第48页
     ·β-半乳糖苷酶活性定量检测第48-49页
   ·蛋白激酶的体外磷酸化分析第49-51页
     ·蛋白原核表达和提取纯化第50页
     ·体外磷酸化试验第50-51页
   ·叶肉细胞原生质体的获得和表达检测的试验方法第51-52页
     ·拟南芥原生质体的获得第51页
     ·质粒转化原生质体的步骤第51-52页
   ·Co-IP 分析第52-53页
   ·GUS 基因的表达检测方法第53页
   ·相对实时定量PCR 的实验材料和步骤第53-55页
     ·除去RNA 中的基因组DNA第53页
     ·RT-PCR第53-54页
     ·实时相对定量PCR(RT-Q-PCR)第54-55页
第三部分 实验结果和讨论第55-75页
   ·pk55 突变体的表型分析第55-59页
     ·Tilling 突变体的鉴定第55-56页
     ·pk55 T-DNA 敲除突变体的表型分析第56-59页
   ·PK55、PK55-6 和PK55-7 蛋白的体外激酶活性分析第59-60页
   ·酵母双杂交的结果分析第60-62页
     ·酵母的转化效率第60-61页
     ·酵母双杂交的初步结果第61-62页
   ·23 个蛋白的体外磷酸化分析第62页
   ·Co-IP 分析第62-63页
   ·DNAJ 抑制PK55 激酶活性的体外磷酸化分析第63-64页
   ·PK55 和DnaJ 互作区域的确定第64-66页
     ·用酵母双杂交检验PK55 和DnaJ 全长和部分短截蛋白是否互作第64-66页
   ·dnaj T-DNA 插入突变的纯合体鉴定和表型分析第66-69页
     ·T-DNA 插入突变体材料的纯合体鉴定(Northern blot)第66-67页
     ·dnaj 突变体的表型分析第67-68页
     ·ABA,ACC 和NaCl 对野生型和突变体dnaj13 、dnaj14 和pk55 幼苗生长的影响第68-69页
   ·双突变体的获得和表型分析第69-71页
   ·DnaJ 和PK55 基因的表达模式分析第71-75页
     ·GUS 报告基因检测DnaJ 和PK55 基因第71页
     ·实时相对定量PCR 检测DnaJ 和PK55 基因的表达第71-75页
结论第75-78页
引物清单第78-85页
参考文献第85-99页
致谢第99-100页

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