| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-22页 |
| ·课题研究的目的和意义 | 第11-12页 |
| ·国内外研究现状 | 第12-20页 |
| ·生物防治植物病害 | 第12-15页 |
| ·球毛壳菌对植物真菌病害的防治 | 第15-16页 |
| ·几丁质酶性质和应用 | 第16-19页 |
| ·巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）表达系统 | 第19-20页 |
| ·课题来源及主要研究内容 | 第20-22页 |
| ·课题来源 | 第20页 |
| ·主要研究内容 | 第20-22页 |
| 第2章 材料与方法 | 第22-37页 |
| ·实验材料 | 第22-25页 |
| ·菌株和质粒 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22-23页 |
| ·酶与试剂 | 第23页 |
| ·引物设计 | 第23页 |
| ·常用贮液 | 第23-24页 |
| ·仪器设备 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-37页 |
| ·胞外表达质粒pPIC9-chi的构建及其鉴定 | 第25-28页 |
| ·几丁质酶基因chi46 转化整合酵母细胞 | 第28-32页 |
| ·酵母转化子细胞的培养与诱导 | 第32页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳分析 | 第32-33页 |
| ·重组几丁质酶的部分酶学特性的研究 | 第33-35页 |
| ·几丁质酶粗酶液抗病原真菌的初步研究 | 第35-37页 |
| 第3章 重组几丁质酶在毕赤酵母中的表达 | 第37-49页 |
| ·胞外表达质粒pPIC9-chi的构建及其鉴定 | 第37-40页 |
| ·胞外表达质粒pPIC9-chi的构建 | 第37-39页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第39-40页 |
| ·几丁质酶基因chi46 转化整合酵母细胞 | 第40-43页 |
| ·重组质粒电转化酵母细胞 | 第40-41页 |
| ·Mut+和Muts转化子的获得 | 第41页 |
| ·筛选阳性转化子 | 第41-43页 |
| ·酵母转化子细胞的培养与诱导 | 第43-45页 |
| ·目的基因在毕赤酵母中的诱导表达 | 第43-44页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳分析 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| ·PCR引物的设计原则 | 第45页 |
| ·酵母转化子鉴定的PCR反应的技巧 | 第45-46页 |
| ·重组载体转化巴斯德方法的选择和条件优化 | 第46页 |
| ·筛选GS115 转化子两种Mut表型的看法 | 第46-47页 |
| ·重组转化子的筛选原则 | 第47页 |
| ·摇瓶培养毕赤酵母原则 | 第47页 |
| ·本章小结 | 第47-49页 |
| 第4章 重组几丁质酶酶学特性及抑菌实验 | 第49-59页 |
| ·酶活标准曲线测定 | 第49页 |
| ·重组子的产酶高峰 | 第49-50页 |
| ·重组几丁质酶的部分酶学特性的研究 | 第50-53页 |
| ·重组几丁质酶酶促反应的最适温度 | 第50-51页 |
| ·重组几丁质酶的热稳定性 | 第51-52页 |
| ·重组几丁质酶酶促反应的最适pH | 第52页 |
| ·各种金属离子对重组几丁质酶的影响 | 第52-53页 |
| ·重组CHI46 抗病原真菌的初步研究 | 第53-55页 |
| ·重组几丁质酶水解病原真菌细胞壁的结果比较 | 第53页 |
| ·平皿抑菌实验 | 第53-55页 |
| ·讨论 | 第55-58页 |
| ·毕赤酵母表达球毛壳菌几丁质酶的讨论 | 第55页 |
| ·关于几丁质酶的活力测定的方法选择及原则 | 第55-56页 |
| ·两种表型转化子的发酵液酶活力比较 | 第56页 |
| ·重组几丁质酶最佳的反应条件组合 | 第56页 |
| ·重组几丁质酶抑菌实验结果分析 | 第56-57页 |
| ·提高重组几丁质酶产率增强抗病原能力的讨论 | 第57-58页 |
| ·本章小结 | 第58-59页 |
| 结论 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第68-70页 |
| 致谢 | 第70页 |