| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 插图或附表清单 | 第13-14页 |
| 注释说明清单 | 第14-15页 |
| 引言 | 第15-17页 |
| 1 肠道病毒71型概述 | 第17-22页 |
| ·EV71的发现及流行 | 第17-18页 |
| ·EV71的结构及理化性质 | 第18-22页 |
| ·病毒粒子结构 | 第18-19页 |
| ·病毒基因组结构 | 第19-20页 |
| ·病毒的理化性质 | 第20-22页 |
| 2 EV71对Ⅰ型干扰素的抵抗作用的研究 | 第22-46页 |
| ·试验材料 | 第22-24页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·主要的工具酶、试剂盒和分子量标准 | 第22页 |
| ·细胞和病毒 | 第22页 |
| ·质粒及引物 | 第22页 |
| ·主要仪器设备 | 第22-23页 |
| ·溶液及缓冲液的配制 | 第23-24页 |
| ·细胞培养液细菌培养液的配制 | 第23页 |
| ·干扰素(α、β)储存液的配制 | 第23页 |
| ·核酸电泳缓冲液的配制 | 第23-24页 |
| ·试验方法 | 第24-40页 |
| ·细胞的复苏 | 第24页 |
| ·HeLa细胞的复苏 | 第24页 |
| ·RD细胞的复苏 | 第24页 |
| ·细胞的传代培养 | 第24-25页 |
| ·细胞计数 | 第25页 |
| ·细胞的冻存 | 第25-26页 |
| ·病毒的扩增 | 第26-27页 |
| ·rHSV-1在HeLa细胞中的扩增 | 第26页 |
| ·EV71在RD细胞中的扩增 | 第26-27页 |
| ·病毒毒力的测定(TCID50) | 第27-28页 |
| ·rHSV毒力的测定 | 第27页 |
| ·细胞培养及96孔板预板(HeLa) | 第27页 |
| ·rHSV病毒接种 | 第27页 |
| ·EV71毒力的测定 | 第27-28页 |
| ·细胞培养及96孔板预板(RD) | 第27-28页 |
| ·EV71病毒接种 | 第28页 |
| ·干扰素(α、β)对HSV-1的影响 | 第28-30页 |
| ·干扰素(α、β)作用剂量及时间的摸索 | 第28-30页 |
| ·荧光显微镜下观察干扰素(α、β)对rHSV-1的影响 | 第30页 |
| ·PCR检测干扰素(α、β)对HSV-1的影响 | 第30页 |
| ·干扰素(α、β)对EV71的影响 | 第30-33页 |
| ·EV71的2A蛋白酶破坏干扰素(α、β)的抗病毒作用 | 第33-40页 |
| ·2A基因真核表达质粒的构建和鉴定 | 第33-39页 |
| ·引物设计 | 第33页 |
| ·EV71-2A目的基因的获得 | 第33-35页 |
| ·提取病毒核酸 | 第33-34页 |
| ·RT-PCR得到目的基因及目的基因的回收 | 第34-35页 |
| ·EV71-2A目的基因的克隆 | 第35-36页 |
| ·EV71-2A基因连接T克隆载体及pcDNA3.1质粒提取及酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·EV71-2A基因真核表达载体的构建 | 第37页 |
| ·EV71-2A基因真核表达质粒的鉴定 | 第37页 |
| ·EV71-2A基因真核表达质粒的大量提取 | 第37-39页 |
| ·2A对干扰素(α、β)的影响 | 第39-40页 |
| ·2A转染HeLa细胞 | 第39页 |
| ·荧光显微镜下观察2A对干扰素(α、β)作用的影响 | 第39-40页 |
| ·试验结果 | 第40-46页 |
| ·病毒毒力的测定(TCID50) | 第40页 |
| ·rHSV TCID50的测定的鉴定 | 第40页 |
| ·EV71 TCID50的测定 | 第40页 |
| ·干扰素(α、β)对HSV-1的影响 | 第40-42页 |
| ·干扰素(α、β)的浓度和剂量的摸索 | 第40-41页 |
| ·荧光显微镜下观察干扰素(α、β)对rHSV-1的影响 | 第41-42页 |
| ·PCR检测干扰素(α、β)对rHSV-1的影响 | 第42页 |
| ·干扰素(α、β)对EV71的影响 | 第42-43页 |
| ·EV71-2A连接T克隆载体及pcDNA3.1质粒的双酶切鉴定 | 第43-44页 |
| ·EV71-2A基因真核表达质粒的双酶切鉴定 | 第44页 |
| ·2A蛋白酶破坏干扰素的抗病毒作用 | 第44-46页 |
| 实验讨论 | 第46-49页 |
| 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-53页 |
| 附录A | 第53-59页 |
| 后记或致谢 | 第59-60页 |
| 作者简介及读研期间主要科研成果 | 第60页 |
