| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-33页 |
| ·促红细胞生成素(EPO)概述 | 第12-20页 |
| ·EPO研究进展 | 第12-13页 |
| ·EPO生理生化特性及结构 | 第13-17页 |
| ·EPO的生理功能 | 第17-19页 |
| ·EPO的应用前景 | 第19-20页 |
| ·丝状真菌蛋白表达系统 | 第20-25页 |
| ·丝状真菌表达载体 | 第20-21页 |
| ·丝状真菌转化方法 | 第21页 |
| ·丝状真菌转化标记的选择 | 第21-22页 |
| ·转化DNA的整合 | 第22-25页 |
| ·重组糖蛋白在瑞氏木霉中的表达 | 第25-32页 |
| ·蛋白表达系统的选择 | 第25-26页 |
| ·融合蛋白标签 | 第26-29页 |
| ·糖蛋白在瑞氏木霉中的糖基化类型 | 第29-32页 |
| ·本文主要研究内容 | 第32-33页 |
| 第二章 人促红细胞生成素在瑞氏木霉中的表达 | 第33-55页 |
| ·材料和方法 | 第33-44页 |
| ·菌株和质粒 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33-34页 |
| ·培养基及培养条件 | 第34-35页 |
| ·重组DNA技术 | 第35页 |
| ·重组质粒pT-△4的构建 | 第35-36页 |
| ·重组质粒pE的构建 | 第36-37页 |
| ·pE质粒转化T.reesei | 第37-38页 |
| ·瑞氏木霉染色体DNA的提取与纯化 | 第38-39页 |
| ·转化子的PCR验证 | 第39页 |
| ·转化子的Dot Blot分析 | 第39-40页 |
| ·转化子的RT-PCR分析 | 第40-41页 |
| ·T.reesei蛋白的SDS-PAGE | 第41-43页 |
| ·T.reesei蛋白的Western blot分析 | 第43-44页 |
| ·结果与讨论 | 第44-53页 |
| ·重组质粒pT-△4的构建 | 第44-46页 |
| ·表达载体pE的构建 | 第46-48页 |
| ·T.reesei转化 | 第48页 |
| ·PCR方法挑选T.reesei阳性转化子 | 第48-50页 |
| ·转化子的Dot Blot杂交分析 | 第50页 |
| ·转化子的RT-PCR验证 | 第50-51页 |
| ·T.reesei转化子胞外蛋白的SDS-PAGE分析 | 第51-52页 |
| ·T.reesei转化子胞外蛋白Western Blot分析 | 第52-53页 |
| ·本章小结 | 第53-55页 |
| 第三章 带有his-tag的epo基因表达载体的构建及转化 | 第55-71页 |
| ·材料和方法 | 第55-59页 |
| ·菌株和质粒 | 第55页 |
| ·主要试剂 | 第55页 |
| ·培养基及培养条件 | 第55页 |
| ·重组DNA技术 | 第55页 |
| ·质粒plt4的构建 | 第55-57页 |
| ·N-端带有his-tag的epo基因表达载体plten的构建 | 第57-58页 |
| ·C-端带有his-tag的epo基因表达载体pltec的构建 | 第58页 |
| ·plten和pltec质粒的T.reesei转化 | 第58页 |
| ·T.reesei染色体的提取 | 第58-59页 |
| ·转化子的PCR验证 | 第59页 |
| ·融合蛋白的镍柱纯化方法 | 第59页 |
| ·结果与讨论 | 第59-70页 |
| ·质粒plt4的构建 | 第59-64页 |
| ·N-端带有his-tag的epo基因表达载体plten的构建 | 第64-66页 |
| ·C-端带有his-tag的epo基因表达载体pltec的构建 | 第66-68页 |
| ·T.reesei转化 | 第68-69页 |
| ·PCR方法挑选T.reesei阳性转化子 | 第69-70页 |
| ·本章小结 | 第70-71页 |
| 全文总结 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
