| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 前言 | 第13-26页 |
| 1 O-GlcNAc 修饰 | 第13-22页 |
| ·O-GlcNAc 修饰的生物合成 | 第13-17页 |
| ·O-GlcNAc 糖基转移酶（OGT） | 第14-15页 |
| ·O-GlcNAc 糖苷酶（OGA） | 第15-16页 |
| ·己糖胺合成途径 | 第16-17页 |
| ·O-GlcNAc 修饰与磷酸化 | 第17-18页 |
| ·O-GlcNAc 修饰的生物学功能 | 第18-19页 |
| ·O-GlcNAc 修饰与细胞周期和生存 | 第18-19页 |
| ·O-GlcNAc 修饰与细胞压力应激 | 第19页 |
| ·O-GlcNAc 修饰与疾病 | 第19-22页 |
| ·O-GlcNAc 修饰与糖尿病 | 第19-20页 |
| ·O-GlcNAc 修饰与神经退行性疾病 | 第20-21页 |
| ·O-GlcNAc 修饰与心血管系统疾病 | 第21页 |
| ·O-GlcNAc 修饰与癌症 | 第21-22页 |
| 2 组织芯片 | 第22-26页 |
| ·组织芯片的原理 | 第22-23页 |
| ·组织芯片的分类 | 第23页 |
| ·组织芯片的制备流程 | 第23-25页 |
| ·组织芯片的应用 | 第25-26页 |
| 第一章 组织芯片 | 第26-39页 |
| 1 实验材料 | 第27-30页 |
| ·组织芯片 | 第27-29页 |
| ·实验试剂 | 第29-30页 |
| ·常用溶液的配制 | 第30页 |
| 2 主要仪器 | 第30页 |
| 3 实验方法 | 第30-32页 |
| ·免疫组化步骤 | 第30-31页 |
| ·染色强度计算方法 | 第31-32页 |
| 4 实验结果 | 第32-36页 |
| ·人的结肠癌、肝癌和胰腺癌与癌旁组织中O-GlcNAc 修饰的检测 | 第32-34页 |
| ·人的结肠癌与癌旁组织中OGT、OGA 表达量的检测 | 第34-36页 |
| 5 小结 | 第36页 |
| 6 讨论 | 第36-39页 |
| 第二章 O-GlcNAc 修饰在结肠癌细胞迁移过程中的作用 | 第39-70页 |
| 第一节 构建 O-GlcNAc 修饰水平降低和升高的细胞模型 | 第40-63页 |
| 1 实验材料 | 第40-43页 |
| ·细胞株 | 第40页 |
| ·菌种与病毒载体 | 第40页 |
| ·实验试剂 | 第40-42页 |
| ·实验溶液配制 | 第42-43页 |
| 2 仪器与设备 | 第43-44页 |
| 3 实验方法 | 第44-55页 |
| ·构建O-GlcNAc 修饰水平降低的细胞模型 | 第44-55页 |
| ·人OGT shRNA 载体的构建 | 第44-50页 |
| ·设计人类OGT shRNA 片段序列 | 第45-46页 |
| ·制备DNA 寡核苷酸片段 | 第46页 |
| ·碱裂解法提取pLKO.1-puro 质粒 | 第46-47页 |
| ·质粒pLKO.1-puro 双酶切 | 第47-48页 |
| ·目的片段胶回收 | 第48页 |
| ·DNA 片段与pLKO.1-puro 载体连接 | 第48-49页 |
| ·制备感受态细胞及质粒转化 | 第49-50页 |
| ·阳性克隆菌株的筛选鉴定 | 第50页 |
| ·构建OGT 基因沉默的结肠癌细胞株 | 第50-55页 |
| ·细胞冻存与复苏 | 第50页 |
| ·细胞传代和培养 | 第50-51页 |
| ·制备慢病毒 | 第51页 |
| ·慢病毒感染细胞及筛选 | 第51-52页 |
| ·Trizol 法抽提细胞总RNA | 第52页 |
| ·反转录PCR 制备cDNA | 第52-53页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第53-54页 |
| ·免疫印迹实验（Western Blot, WB） | 第54-55页 |
| ·构建O-GlcNAc 修饰水平升高的细胞模型 | 第55页 |
| 4 实验结果 | 第55-61页 |
| ·构建OGT 基因沉默载体 | 第55-56页 |
| ·筛选OGT 基因沉默细胞株 | 第56页 |
| ·实时荧光定量PCR 检测OGT mRNA 的表达 | 第56-58页 |
| ·免疫印迹法检测OGT 蛋白表达量 | 第58-59页 |
| ·OGT 沉默对HT29 细胞O-GlcNAc 修饰水平的影响 | 第59-60页 |
| ·Thiamet-G 处理对HT29 细胞O-GlcNAc 修饰水平的影响 | 第60-61页 |
| 5 小结 | 第61页 |
| 6 讨论 | 第61-63页 |
| 第二节 O-GlcNAc 修饰对结肠癌细胞 HT29 的生物学特性的影响 | 第63-70页 |
| 1 实验材料 | 第63页 |
| ·细胞株 | 第63页 |
| ·实验试剂 | 第63页 |
| 2 仪器与设备 | 第63页 |
| 3 实验方法 | 第63-65页 |
| ·MTT 法检测细胞增殖能力 | 第63-64页 |
| ·细胞锚定非依赖性生长实验 | 第64页 |
| ·细胞迁移实验（Transwell 法） | 第64-65页 |
| ·数据的统计处理 | 第65页 |
| 4 实验结果 | 第65-67页 |
| ·O-GlcNAc 修饰对结肠癌细胞HT29 增殖的影响 | 第65-66页 |
| ·O-GlcNAc 对结肠癌细胞锚定非依赖性生长能力的影响 | 第66页 |
| ·O-GlcNAc 对结肠癌细胞迁移能力的影响 | 第66-67页 |
| 5 小结 | 第67页 |
| 6 讨论 | 第67-70页 |
| 参考文献 | 第70-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 个人简历 | 第76页 |
| 在读期间的学术成果 | 第76页 |
