| 摘要 | 第1-15页 |
| ABSTRACT | 第15-17页 |
| 第一章 综述 | 第17-30页 |
| ·中心蛋白概述 | 第17-21页 |
| ·中心蛋白的结构 | 第17-20页 |
| ·中心蛋白的功能 | 第20-21页 |
| ·中心蛋白的磷酸化 | 第21-29页 |
| ·蛋白质磷酸化概述 | 第21-23页 |
| ·蛋白激酶及其共有序列(Consensus Sequence)和催化机理 | 第23-29页 |
| ·本课题研究的意义 | 第29-30页 |
| 第二章 中心蛋白~*的构建、表达及纯化 | 第30-40页 |
| ·引言 | 第30页 |
| ·实验材料 | 第30-33页 |
| ·菌种和质粒 | 第30页 |
| ·寡核苷酸 | 第30-31页 |
| ·主要生化试剂 | 第31页 |
| ·主要试剂的配制 | 第31-32页 |
| ·主要仪器设备 | 第32-33页 |
| ·实验方法 | 第33-36页 |
| ·重组质粒的构建 | 第33-35页 |
| ·中心蛋白的表达和纯化 | 第35-36页 |
| ·实验结果 | 第36-39页 |
| ·重组质粒的构建 | 第36-37页 |
| ·中心蛋白的表达和纯化 | 第37-39页 |
| ·结论 | 第39-40页 |
| 第三章 中心蛋白~*的磷酸化及其位点鉴定 | 第40-53页 |
| ·引言 | 第40-41页 |
| ·实验材料 | 第41页 |
| ·实验试剂 | 第41页 |
| ·实验仪器 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-43页 |
| ·Mg~(2+)储备液的配制 | 第41-42页 |
| ·Ca~(2+)储备液的配制 | 第42页 |
| ·Tb~(3+)储备液的配制 | 第42页 |
| ·磷酸化缓冲液的配制 | 第42页 |
| ·磷酸参比液的配制 | 第42页 |
| ·脱钙中心蛋白储备液的制备 | 第42页 |
| ·脱钙中心蛋白储备液的浓度测定 | 第42页 |
| ·磷酸化中心蛋白的制备 | 第42-43页 |
| ·金属离子存在时磷酸化中心蛋白的制备 | 第43页 |
| ·核磁共振磷谱(~(31)P-NMR)的测定 | 第43页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分析 | 第43页 |
| ·结果与讨论 | 第43-52页 |
| ·核磁共振磷谱(~(31)P-NMR)的测定 | 第43-45页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分析 | 第45页 |
| ·中心蛋白磷酸化条件的优化 | 第45-47页 |
| ·Ca~(2+)、Tb~(3+)对中心蛋白磷酸化的影响 | 第47-50页 |
| ·EoCen磷酸化位点的鉴定 | 第50-52页 |
| ·结论 | 第52-53页 |
| 第四章 磷酸化对中心蛋白~*构象的影响 | 第53-62页 |
| ·引言 | 第53页 |
| ·实验材料 | 第53-54页 |
| ·实验试剂 | 第53页 |
| ·实验仪器 | 第53-54页 |
| ·实验方法 | 第54-55页 |
| ·TNS储备液的配制 | 第54页 |
| ·Ca~(2+)储备液的配制 | 第54页 |
| ·Tb~(3+)储备液的配制 | 第54页 |
| ·磷酸化缓冲液的配制 | 第54页 |
| ·脱钙中心蛋白储备液的制备 | 第54页 |
| ·脱钙中心蛋白储备液的浓度测定 | 第54页 |
| ·磷酸化中心蛋白的制备 | 第54页 |
| ·磷酸化蛋白中残余ATP的去除 | 第54-55页 |
| ·磷酸化中心蛋白储备液的浓度测定 | 第55页 |
| ·非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(native-PAGE)分析 | 第55页 |
| ·圆二色谱(CD光谱)分析 | 第55页 |
| ·疏水性荧光探针TNS分析 | 第55页 |
| ·结果与讨论 | 第55-61页 |
| ·非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(native-PAGE)分析 | 第55-56页 |
| ·圆二色谱(CD光谱)分析 | 第56-57页 |
| ·疏水性荧光探针TNS分析 | 第57-61页 |
| ·结论 | 第61-62页 |
| 第五章 磷酸化对中心蛋白~*与蜂毒素作用的影响 | 第62-74页 |
| ·引言 | 第62页 |
| ·实验材料 | 第62-63页 |
| ·实验试剂 | 第62-63页 |
| ·实验仪器 | 第63页 |
| ·实验方法 | 第63-65页 |
| ·蜂毒素(melittin)储备液的配制 | 第63-64页 |
| ·Ca~(2+)储备液的配制 | 第64页 |
| ·Tb~(3+)储备液的配制 | 第64页 |
| ·磷酸化缓冲液的配制 | 第64页 |
| ·脱钙中心蛋白储备液的制备 | 第64页 |
| ·脱钙中心蛋白储备液的浓度测定 | 第64页 |
| ·磷酸化中心蛋白的制备 | 第64页 |
| ·磷酸化蛋白中残余ATP的去除 | 第64页 |
| ·磷酸化中心蛋白储备液的浓度测定 | 第64页 |
| ·圆二色谱(CD光谱)分析 | 第64页 |
| ·非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(native-PAGE)分析 | 第64页 |
| ·C-EoCen、P-C-EoCen与melittin作用的荧光分析 | 第64-65页 |
| ·结果与讨论 | 第65-73页 |
| ·C-EoCen、P-C-EoCen与melittin作用的CD光谱分析 | 第65-66页 |
| ·C-EoCen、P-C-EoCen与melittin作用的native-PAGE分析 | 第66-67页 |
| ·C-EoCen、P-C-EoCen与melittin作用的荧光光谱分析 | 第67-73页 |
| ·结论 | 第73-74页 |
| 第六章 总结与展望 | 第74-76页 |
| ·总结 | 第74-75页 |
| ·展望 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-88页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 个人简况及联系方式 | 第90-92页 |
