| 内容摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-14页 |
| 1 引言 | 第14-36页 |
| ·课题研究背景、立题依据及研究意义 | 第14-15页 |
| ·文献综述 | 第15-35页 |
| ·紫杉醇概述 | 第15-17页 |
| ·生物技术生产紫杉醇的研究现状 | 第17-24页 |
| ·原生质体诱变技术 | 第24-25页 |
| ·紫杉醇的生物合成途径及其代谢调控 | 第25-35页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第35-36页 |
| 2 紫杉醇产生菌产紫杉醇发酵培养条件的优化 | 第36-47页 |
| ·材料与方法 | 第36-39页 |
| ·材料 | 第36-37页 |
| ·试验方法 | 第37-39页 |
| ·结果与讨论 | 第39-47页 |
| ·发酵条件单因素试验 | 第39-43页 |
| ·生物量测定 | 第43-44页 |
| ·不同培养时期紫杉醇产量的测定 | 第44-47页 |
| 3 代谢调节剂间的协同作用对紫杉醇产生菌紫杉醇产量影响的研究 | 第47-66页 |
| ·前体物间协同作用对紫杉醇产生菌生物合成紫杉醇影响的研究 | 第47-52页 |
| ·材料与方法 | 第47-48页 |
| ·试验方法 | 第48-49页 |
| ·结果与讨论 | 第49-52页 |
| ·添加诱导子对紫杉醇生物合成的影响 | 第52-56页 |
| ·材料与方法 | 第52-53页 |
| ·试验方法 | 第53页 |
| ·结果与讨论 | 第53-56页 |
| ·前体物和诱导子间的协同对紫杉醇产生菌生物合成紫杉醇影响的研究 | 第56-60页 |
| ·材料与方法 | 第56-57页 |
| ·试验方法 | 第57-59页 |
| ·结果与讨论 | 第59-60页 |
| ·前体物、抑制剂及诱导子的协同作用对紫杉醇生物合成影响的研究 | 第60-66页 |
| ·试验材料 | 第60-61页 |
| ·试验方法 | 第61-63页 |
| ·结果与讨论 | 第63-66页 |
| 4 紫杉醇产生菌原生质体诱变选育高产紫杉醇突变株的研究 | 第66-86页 |
| ·材料 | 第66-68页 |
| ·菌株 | 第66页 |
| ·培养基 | 第66-68页 |
| ·主要试剂 | 第68页 |
| ·试验仪器及设备 | 第68页 |
| ·方法 | 第68-72页 |
| ·菌丝体的培养和收集 | 第68-69页 |
| ·原生质体制备 | 第69页 |
| ·原生质体活性检测与再生 | 第69-70页 |
| ·潮霉素最小抑制浓度的筛选 | 第70页 |
| ·原生质体诱变 | 第70-71页 |
| ·突变株的抗性筛选 | 第71-72页 |
| ·遗传稳定性的测定 | 第72页 |
| ·紫杉醇提取方法 | 第72页 |
| ·紫杉醇定性及半定量方法 | 第72页 |
| ·柱层析纯化 | 第72页 |
| ·紫杉醇定量方法 | 第72页 |
| ·结果与讨论 | 第72-86页 |
| ·原生质体制备 | 第72-76页 |
| ·原生质体再生 | 第76-79页 |
| ·原生质体诱变育种 | 第79-86页 |
| 5 紫杉醇高产菌株间遗传变异初探 | 第86-101页 |
| ·材料 | 第86-88页 |
| ·菌株 | 第86页 |
| ·培养基 | 第86页 |
| ·主要分子生物学与生化试剂 | 第86-87页 |
| ·溶液和溶液的配制 | 第87-88页 |
| ·染色液和染色液的配制 | 第88页 |
| ·试验仪器及设备 | 第88页 |
| ·方法 | 第88-92页 |
| ·菌丝体培养和收集 | 第88页 |
| ·紫杉醇产生菌基因组 DNA的提取及鉴定 | 第88-90页 |
| ·同工酶的提取 | 第90页 |
| ·RAPD扩增 | 第90-91页 |
| ·AFLP扩增 | 第91-92页 |
| ·紫杉醇产生菌rDNA ITS区的克隆与序列分析 | 第92页 |
| ·结果与分析 | 第92-101页 |
| ·紫杉醇产生菌基因组 DNA的提取 | 第93-94页 |
| ·同工酶分析 | 第94-95页 |
| ·RAPD分析 | 第95-97页 |
| ·AFLP分析 | 第97页 |
| ·ITS序列分析 | 第97-101页 |
| 6 紫杉醇生物合成代谢途径中紫杉烯合成酶基因的克隆 | 第101-119页 |
| ·试验材料 | 第101-102页 |
| ·菌种和质粒 | 第101页 |
| ·培养基 | 第101-102页 |
| ·主要分子生物学及生化试剂 | 第102页 |
| ·试验仪器及设备 | 第102页 |
| ·试验方法 | 第102-111页 |
| ·东北红豆杉(Taxus cuspidata)细胞总 RNA的提取及鉴定 | 第102-103页 |
| ·总 RNA中 DNA污染的去除 | 第103-104页 |
| ·引物的设计与合成 | 第104页 |
| ·反转录与聚合酶链式反应(RT-PCR) | 第104-105页 |
| ·PCR扩增 RT-PCR产物 | 第105-106页 |
| ·纯化 PCR产物 | 第106页 |
| ·回收的 PCR扩增产物与载体的连接反应 | 第106-107页 |
| ·E.coli JM109感受态细胞的制备 | 第107-108页 |
| ·连接产物转化 E.coli JM109感受态细胞 | 第108页 |
| ·大肠杆菌中质粒 DNA的制备 | 第108-109页 |
| ·重组质粒的筛选与鉴定 | 第109-110页 |
| ·测序 | 第110页 |
| ·序列的同源性比较 | 第110-111页 |
| ·结果与分析 | 第111-119页 |
| ·提取东北红豆杉(Taxus cuspidata)细胞总 RNA | 第111页 |
| ·引物设计 | 第111页 |
| ·反转录与聚合酶链式反应(RT-PCR) | 第111-113页 |
| ·PCR扩增产物与载体的连接及转化 | 第113-114页 |
| ·克隆的筛选与鉴定 | 第114-119页 |
| 7 紫杉烯合成酶基因和紫杉醇产生菌 HQD_(33)基因组 DNA的 Southern blotting | 第119-128页 |
| ·试验材料 | 第119-120页 |
| ·菌种 | 第119页 |
| ·培养基 | 第119页 |
| ·主要分子生物学及生化试剂 | 第119页 |
| ·试验仪器、用品及器具 | 第119页 |
| ·试剂的配制 | 第119-120页 |
| ·试验方法 | 第120-124页 |
| ·紫杉醇产生菌-HQD_(33)基因组 DNA的提取及鉴定 | 第120页 |
| ·Southern转移 | 第120-122页 |
| ·DNA探针的制备 | 第122-124页 |
| ·DNA分子杂交(DNA hybridization) | 第124页 |
| ·杂交后洗膜 | 第124页 |
| ·放射自显影 | 第124页 |
| ·结果与分析 | 第124-128页 |
| ·质粒及紫杉醇产生菌 HQD_(33)基因组 DNA酶切 | 第126页 |
| ·紫杉醇产生菌 HQD_(33)基因组 DNA的 Southern blotting | 第126-128页 |
| 8 结论 | 第128-130页 |
| 参考文献(REFERENCES) | 第130-142页 |
| 致谢(Acknowledgements) | 第142-143页 |
| 博士生期间发表的学术论文和专著 | 第143-144页 |
| 博士后期间发表的学术论文和专著 | 第144-145页 |
| 个人基本情况 | 第145-146页 |
| 永久通信地址 | 第146页 |
