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野油菜黄单胞菌野油菜致病变种海藻糖合成代谢注释基因的功能鉴定

摘要第1-4页
ABSTRACT第4-9页
第一章 前言第9-16页
   ·野油菜黄单胞菌(XANTHOMONAS CAMPESTRIS)概况第9-11页
     ·野油菜黄单胞菌简介第9页
     ·野油菜黄单胞菌一些重要的致病因子和致病相关基因第9-11页
   ·海藻糖生物合成研究进展第11-15页
     ·海藻糖的物理特性第11-12页
     ·海藻糖的生物合成途径第12-13页
     ·海藻糖生物合成在碳代谢调节中的作用第13-15页
     ·海藻糖生物合成与致病性第15页
   ·本工作的目的与内容第15-16页
第二章 材料与方法第16-30页
   ·材料第16-20页
     ·菌株和质粒第16页
     ·培养基及生长条件第16-18页
     ·抗生素及其贮存、使用浓度第18-19页
     ·溶液与缓冲液第19-20页
   ·方法第20-30页
     ·常规 PCR反应第20-21页
     ·反转录 PCR第21-22页
     ·琼脂糖凝胶电泳第22页
     ·PCR产物的回收与纯化第22页
     ·细菌总 DNA的提取第22-23页
     ·总RNA的提取第23-24页
     ·质粒的提取第24页
     ·限制性内切酶酶切第24页
     ·DNA连接第24-25页
     ·DNA的电脉冲转化第25页
     ·三亲本接合第25-26页
     ·突变体的功能互补第26页
     ·细菌在完全培养基中的生长繁殖曲线的绘制第26页
     ·细菌在MMX培养基中的生长繁殖曲线的绘制第26-27页
     ·细菌在寄主中的生长繁殖的测定第27页
     ·细菌在不同碳源中的生长测定第27页
     ·细菌在 NCM+NaAc培养基中的生长繁殖曲线的绘制第27页
     ·细菌NaCl敏感性实验第27页
     ·胞外酶的检测第27-28页
     ·胞外多糖的检测第28页
     ·致病性试验第28-30页
第三章 结果与分析第30-50页
   ·野油菜黄单胞菌中存在与大肠杆菌OTSAB基因、鼻疽奴卡菌的6-磷酸海藻糖磷酸化酶基因同源的基因第30-32页
   ·XC1076、XC1077、XC1078在基因组上的位置第32-33页
   ·XC1076、XC1077、XC1078突变体的获得第33-34页
   ·突变体006B12、110C01、237E11的功能互补第34-37页
     ·互补片段的扩增第34-35页
     ·将互补片段连接到载体pLAFR6上第35-36页
     ·三亲本接合获得突变体第36-37页
   ·突变体的生长测定第37-43页
     ·突变体在完全培养基中的生长测定第37-38页
     ·突变体在基本培养基中的生长测定第38-39页
     ·突变体在寄主中的生长繁殖的测定第39-40页
     ·突变体在不同碳源中的生长测定第40-42页
     ·突变体在 NCM+NaAc培养基中的生长繁殖曲线的绘制第42-43页
   ·突变体 NaCl敏感性实验第43-44页
   ·突变体的过敏性(HR)反应第44-45页
   ·突变体的胞外多糖、胞外蛋白酶、胞外纤维素酶、胞外淀粉酶检测第45-47页
   ·突变体的致病性实验第47-48页
   ·XC1078突变体237E11的转录分析第48-50页
     ·XC1078的突变体237E11总RNA的提取第48-49页
     ·反转录 PCR第49-50页
第四章 讨论第50-54页
   ·XC1078是单独转录的第50页
   ·XC1076的实验结果第50-51页
   ·XC1077的实验结果第51-52页
   ·XC1078与糖酵解和糖异生有关第52页
   ·XC1078与致病性有关第52页
   ·XC1078与抗高渗有关第52-54页
参考文献第54-58页
致谢第58页

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