| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-21页 |
| 1 植物抗病分子机制及抗病基因工程 | 第9-14页 |
| ·植物抗病分子机制 | 第9-10页 |
| ·植物抗病基因的克隆及结构、功能 | 第10-11页 |
| ·植物抗病过程中的信号传导 | 第11-13页 |
| ·植物抗病基因工程 | 第13-14页 |
| 2 植物系统获得抗性,SAR | 第14-17页 |
| ·水杨酸是SAR信号转导途径的重要信号分子 | 第14页 |
| ·SAR的标志基因 | 第14-15页 |
| ·SAR的化学激活剂 | 第15-16页 |
| ·NPR1是拟南芥SAR的关键基因 | 第16-17页 |
| ·NPR1依赖的SA信号途径 | 第16页 |
| ·NPR1的存在形式、部位及调控SAR之间的关系 | 第16页 |
| ·NPR1激活PR基因表达的机理 | 第16-17页 |
| 3 辣椒抗病基因工程 | 第17-18页 |
| 4 RNA干涉(RNA interference,RNAi)技术 | 第18-20页 |
| ·RNA干涉的发现 | 第18页 |
| ·RNA干涉的定义及其作用机制 | 第18-19页 |
| ·RNA干涉技术在功能基因组中的应用 | 第19-20页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-37页 |
| 1 质粒与菌株 | 第21页 |
| 2 辣椒品种 | 第21页 |
| 3 培养基和培养条件 | 第21-23页 |
| ·培养基 | 第21-23页 |
| ·LB培养基 | 第21页 |
| ·SOC培养基 | 第21-22页 |
| ·YEB培养基 | 第22页 |
| ·MS培养基 | 第22-23页 |
| ·培养条件 | 第23页 |
| ·菌种保藏 | 第23页 |
| 4 抗生素及其使用浓度 | 第23页 |
| 5 辣椒组织培养所用激素、生长素的配置方法及其使用浓度 | 第23-24页 |
| 6 常用溶液及缓冲液 | 第24页 |
| 7 质粒DNA的提取 | 第24-25页 |
| 8 DNA沉淀 | 第25页 |
| 9 DNA溶液中蛋白质及RNA的去除 | 第25-26页 |
| 10 DNA片段的酶切、回收、连接和转化 | 第26页 |
| 11 辣椒总RNA的提取 | 第26页 |
| 12 辣椒全长cDNA的克隆 | 第26-30页 |
| ·引物的设计 | 第26-27页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第27-28页 |
| ·用特异性引物扩增目的基因片段 | 第28-30页 |
| ·辣椒全长cDNA的克隆 | 第30页 |
| 13 PCR反应体系及反应条件 | 第30-31页 |
| ·一般PCR反应体系 | 第30页 |
| ·PCR反应条件 | 第30-31页 |
| ·马铃薯GA20氧化酶基因第一个内含子序列的扩增 | 第30页 |
| ·辣椒全长cDNA部分区段的扩增 | 第30-31页 |
| ·对转基因植株外源基因检测的PCR扩增 | 第31页 |
| 14 植物总DNA的制备 | 第31-32页 |
| ·碱提取法(制备用于PCR检测的DNA粗提液) | 第31页 |
| ·CTAB法(制备用于Southern杂交的植物总DNA) | 第31-32页 |
| 15 Southern杂交 | 第32-34页 |
| ·Southern转移 | 第32-33页 |
| ·探针标记——随机引物标记 | 第33-34页 |
| ·杂交 | 第34页 |
| ·预杂交 | 第34页 |
| ·杂交 | 第34页 |
| ·洗膜 | 第34页 |
| ·放射自显影 | 第34页 |
| 16 三亲本接合(Triparental Conjugation) | 第34-35页 |
| 17 辣椒的遗传转化 | 第35-37页 |
| ·辣椒组织培养和遗传转化的培养基 | 第35页 |
| ·辣椒的遗传转化 | 第35-37页 |
| 第三章 结果与分析 | 第37-48页 |
| 1 辣椒表达载体pBI121-OsNPR1的构建 | 第37-38页 |
| 2 辣椒表达载体pBI121-OsNPR1对天等一号的转化 | 第38-40页 |
| ·天等一号的转化及筛选 | 第38-39页 |
| ·转基因植株的分子鉴定 | 第39-40页 |
| 3 辣椒CaNPR1基因全长cDNA的克隆 | 第40-43页 |
| ·CaNPR1的RT-PCR | 第40-41页 |
| ·辣椒CaNPR1基因全长cDNA的克隆 | 第41页 |
| ·辣椒CaNPR1基因的同源性比较 | 第41-43页 |
| 4 RNA干涉植物表达载体pCaNPR1-RNAi的构建 | 第43-45页 |
| 5 辣椒表达载体pCaNPR1-RNAi对桂研五号的转化 | 第45-48页 |
| ·桂研五号的转化及筛选 | 第45-46页 |
| ·转基因植株的PCR鉴定 | 第46页 |
| ·转基因植株的Southern杂交分析 | 第46-48页 |
| 第四章 讨论 | 第48-50页 |
| 1 水稻OsNPR1基因对辣椒的转化 | 第48页 |
| 2 辣椒CaNPR1基因 | 第48-49页 |
| 3 高效RNA干涉植物表达载体的构建 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 攻读硕士期间发表论文情况 | 第62页 |
