| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 1 前言 | 第9-22页 |
| ·漆酶的研究概况 | 第9-16页 |
| ·漆酶的理化性质 | 第9-12页 |
| ·产漆酶的微生物 | 第9-10页 |
| ·漆酶的活性测定方法 | 第10页 |
| ·漆酶的种类和特性 | 第10-11页 |
| ·漆酶分子催化活性中心结构与功能 | 第11页 |
| ·催化反应机理 | 第11-12页 |
| ·漆酶分子生物学研究进展 | 第12-15页 |
| ·漆酶基因氨基酸序列分析 | 第12-13页 |
| ·漆酶基因的克隆 | 第13-14页 |
| ·漆酶基因结构分析和组织分析 | 第14页 |
| ·漆酶的表达调节 | 第14-15页 |
| ·漆酶基因的异源表达 | 第15页 |
| ·漆酶的应用 | 第15-16页 |
| ·cDNA 末端快速扩增技术(RACE)研究进展 | 第16-18页 |
| ·RACE 技术原理 | 第16页 |
| ·RACE 技术的局限性 | 第16-17页 |
| ·RACE 技术的改进与优化(唐克轩等，2002) | 第17-18页 |
| ·简并引物的使用 | 第17页 |
| ·反转录效率的提高 | 第17页 |
| ·加尾反应 | 第17-18页 |
| ·RACE 在基因克隆上的技术优势及其前景 | 第18页 |
| ·基因组步行技术（BD GenomeWalker Universal Kit User Manual） | 第18-20页 |
| ·本研究的目的意义 | 第20-21页 |
| ·技术路线 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-38页 |
| ·材料 | 第22-23页 |
| ·供试菌种 | 第22页 |
| ·试剂 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22页 |
| ·菌株和质粒 | 第22-23页 |
| ·方法 | 第23-38页 |
| ·菌种培养及菌丝收集 | 第23页 |
| ·漆酶活性的检测 | 第23页 |
| ·白腐菌D1 总RNA 的提取 | 第23-24页 |
| ·白腐菌D1 总DNA 的提取(FDEB 法) | 第24-25页 |
| ·基因组DNA 的消化（BD GenomeWalker Universal Kit User Manual） | 第25页 |
| ·DNA 的纯化（BD GenomeWalker~(TM) Universal Kit User Manual） | 第25-26页 |
| ·基因组DNA 与接头连接（BD GenomeWalker~(TM) Universal Kit User Manual） | 第26页 |
| ·基因的PCR 扩增 | 第26-32页 |
| ·引物设计、合成 | 第26-27页 |
| ·3’-RACE 基因特异引物设计 | 第26-27页 |
| ·基因组步行特异性引物设计 | 第27页 |
| ·扩增全长序列的特异性引物设计 | 第27页 |
| ·漆酶基因PCR 扩增 | 第27-30页 |
| ·3’-RACE 扩增基因3’端 | 第27-28页 |
| ·基因组步行扩增基因5’端结构基因 | 第28-30页 |
| ·全长序列的扩增 | 第30-32页 |
| ·全长cDNA 的扩增 | 第30-31页 |
| ·全长DNA 的扩增 | 第31-32页 |
| ·目的片段的回收及纯化 | 第32-33页 |
| ·PCR 回收产物与T-载体连接 | 第33页 |
| ·连接产物的转化 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第33页 |
| ·转化 | 第33-34页 |
| ·质粒的提取 | 第34页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第34-35页 |
| ·漆酶基因的序列测定 | 第35-36页 |
| ·表达载体（pPIC9K/Lcc）的构建 | 第36-38页 |
| ·Lcc cDNA 片段的大量酶切与回收 | 第36页 |
| ·pPIC9K 的酶切片段回收 | 第36页 |
| ·载体与Lcc 基因的连接与转化 | 第36-37页 |
| ·重组质粒的提取纯化及鉴定 | 第37-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-50页 |
| ·漆酶活性检测 | 第38页 |
| ·白腐菌D1 总RNA 的提取 | 第38页 |
| ·白腐菌D1 总DNA 的提取 | 第38-39页 |
| ·基因组DNA 消化 | 第39-40页 |
| ·DNA 纯化 | 第40页 |
| ·3’RACE | 第40-41页 |
| ·基因组步行 | 第41-42页 |
| ·第一轮PCR 反应 | 第41页 |
| ·第二轮PCR | 第41-42页 |
| ·白腐菌D1 漆酶基因全长cDNA 的扩增 | 第42-45页 |
| ·白腐菌D1 漆酶DNA 的扩增 | 第45-48页 |
| ·漆酶DNA 的结构分析 | 第46-48页 |
| ·表达载体（pPIC9K/Lcc）的构建 | 第48-50页 |
| 4 讨论 | 第50-52页 |
| ·SMART RACE 与基因组步行在白腐菌D1 菌漆酶基因克隆上的应用 | 第50-51页 |
| ·白腐菌D1 漆酶基因结构分析 | 第51-52页 |
| ·白腐菌D1 漆酶cDNA | 第51页 |
| ·内含子 | 第51-52页 |
| 5 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
