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抗cyclin D1人源单链抗体的原核表达、纯化及活性研究

第一章 引言第1-20页
   ·单链抗体技术第8-15页
     ·单链抗体的产生第8-9页
     ·单链抗体的结构及特点第9-10页
     ·单链抗体的来源第10-12页
       ·杂交瘤细胞第10-11页
       ·噬菌体抗体库第11-12页
       ·体内筛选第12页
     ·单链抗体的研究进展第12-15页
       ·单链抗体多聚体第12页
       ·双特异性单链抗体第12-13页
       ·单域抗体或最小识别单位第13页
       ·具有恒定区的单链抗体第13-14页
       ·胞内抗体第14-15页
   ·cyclin D1与肿瘤第15-18页
     ·cyclin D1蛋白的发现及生物学特点第15页
     ·cyclin D1 蛋白的作用机制第15-17页
     ·cyclin Dl 蛋白与肿瘤的关系第17页
     ·cyclin Dl 与肿瘤治疗第17-18页
   ·本研究的立题依据及意义第18-20页
第二章 实验材料与方法第20-33页
   ·实验材料第20-25页
     ·噬菌体抗体、菌株及细胞株第20页
     ·主要试剂,缓冲液及培养基第20-25页
       ·各种溶液配制第20-25页
   ·实验仪器第25-26页
   ·实验方法第26-33页
     ·辅助噬菌体的扩增及滴度的测定第26-27页
     ·噬菌体抗体的扩增及滴度测定第27页
     ·噬菌体抗体的抗原结合活性鉴定第27-28页
     ·ELISA 法检测可溶性scFv 的活性第28页
     ·噬菌体单链抗体的可溶性表达及纯化第28-29页
     ·Westernblot 检测表达和纯化的scFv第29-30页
     ·竞争性ELISA 法检测scFv 的活性第30页
     ·单链抗体的亲和力测定第30页
     ·单链抗体与肿瘤细胞内cyclin D1 蛋白的相互作用第30-33页
       ·HeLa 与MCF-7 细胞的培养第30-31页
       ·HeLa 与MCF-7 细胞爬片的制备第31页
       ·Dot-blot 实验第31-32页
       ·免疫荧光染色实验第32-33页
第三章 实验结果第33-45页
   ·辅助噬菌体的扩增及滴度第33页
   ·噬菌体抗体的扩增及滴度第33页
   ·噬菌体抗体的活性鉴定第33页
   ·ELISA 法检测可溶性scFv 的活性第33-35页
   ·scFv 的可溶性表达及纯化第35-38页
   ·Westernblot 检测scFv 的表达和纯化第38页
   ·竞争性ELISA 法检测scFv 的活性第38-39页
   ·scFv4 及scFv5 的亲和力及效价测定第39-40页
   ·Dot-blot 实验第40-45页
第四章 讨论第45-49页
   ·抗cyclin D1 噬菌体单链抗体的表达纯化系统的建立第45-46页
   ·单链抗体的亲和力测定方法的选择第46-47页
   ·抗cyclin D1 蛋白单链抗体的生物学活性分析第47-49页
第五章 结论第49-50页
参考文献第50-57页
中文摘要第57-60页
英文摘要第60-62页
致谢第62页

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