| 前言 | 第1-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-25页 |
| 1 昆虫滞育的生理、生化基础 | 第11-12页 |
| ·代谢物质的积累与滞育 | 第11页 |
| ·能量代谢的降低与育 | 第11-12页 |
| ·抗寒性与滞育 | 第12页 |
| ·耐干旱性和耐高温性与滞育 | 第12页 |
| ·其它的生理生化变化 | 第12页 |
| 2 昆虫滞育的激素调节 | 第12-14页 |
| ·卵滞育 | 第13页 |
| ·幼虫滞育 | 第13-14页 |
| ·蛹滞育 | 第14页 |
| ·成虫滞育 | 第14页 |
| 3 家蚕滞育和活化的研究 | 第14-19页 |
| ·家蚕的滞育决定 | 第14-17页 |
| ·家蚕滞育激素的结构 | 第15页 |
| ·滞育激素基因的分离和表达 | 第15-16页 |
| ·家蚕滞育激素的作用机制 | 第16页 |
| ·家蚕滞育在遗传学上的研究 | 第16-17页 |
| ·家蚕滞育卵的活化 | 第17-19页 |
| 4 昆虫生物钟基因的研究 | 第19-25页 |
| ·果蝇的昼夜生物钟基因 | 第19-21页 |
| ·家蚕的滞育生物钟酯酶A4 的研究 | 第21-25页 |
| ·酯酶A4 的发现 | 第21页 |
| ·酯酶A4 的测时功能 | 第21-22页 |
| ·酯酶A4 的作用机制 | 第22-23页 |
| ·酯酶A4 的基因 | 第23-25页 |
| 第二章 家蚕滞育生物钟基因ea4的序列测定与分析 | 第25-46页 |
| 1 材料与方法 | 第25-31页 |
| ·实验材料 | 第25-27页 |
| ·生物材料 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25-27页 |
| ·RNA 提取试剂 | 第25-26页 |
| ·培养基 | 第26页 |
| ·碱法质粒抽提试剂 | 第26页 |
| ·核酸电泳相关试剂 | 第26页 |
| ·常用缓冲液和试剂 | 第26-27页 |
| ·其它试剂 | 第27页 |
| ·研究方法 | 第27-31页 |
| ·引物设计 | 第27-28页 |
| ·引物P1、P2 | 第27页 |
| ·引物P3、P4 | 第27-28页 |
| ·引物P5、P6 | 第28页 |
| ·家蚕脂肪体总RNA 的抽提 | 第28页 |
| ·甲醛RNA 变性凝胶电泳 | 第28页 |
| ·cDNA 的合成 | 第28页 |
| ·PCR 反应体系及条件设置 | 第28-29页 |
| ·目的基因cDNA 的回收 | 第29页 |
| ·连接反应 | 第29页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
| ·连接产物的转化 | 第30页 |
| ·重组质粒的筛选 | 第30页 |
| ·质粒DNA 的制备 | 第30-31页 |
| 2 结果与分析 | 第31-44页 |
| ·简并引物RT-PCR 获得ea4 基因片段的序列 | 第31-37页 |
| ·RNA 的提取 | 第31页 |
| ·反转录cDNA 结果 | 第31-32页 |
| ·RT-PCR 扩增 | 第32页 |
| ·ea4-I 的cDNA 序列 | 第32-33页 |
| ·ea4-I 的预测翻译产物 | 第33页 |
| ·ea4-I 的生物信息学分析 | 第33-35页 |
| ·ea4-I 的网上比对结果 | 第33-34页 |
| ·ea4-I 与两个WGS 相应序列的预测翻译产物分析 | 第34-35页 |
| ·两个WGS 的分析 | 第35-36页 |
| ·EA4 全长基因的预测 | 第36-37页 |
| ·EA4 全基因的获得 | 第37-39页 |
| ·PCR 结果 | 第37页 |
| ·序列测定与分析 | 第37-39页 |
| ·EA4 的基因组结构 | 第39-43页 |
| ·引物P5,P6-PCR 结果及酶切鉴定 | 第39-40页 |
| ·测序结果与分析 | 第40-43页 |
| ·ea4 基因组结构 | 第43-44页 |
| 3 讨论 | 第44-46页 |
| ·材料选择 | 第44页 |
| ·序列可靠性 | 第44-45页 |
| ·对原始EA4 的修正 | 第45页 |
| ·ea4 基因启动子的预测 | 第45-46页 |
| 第三章家蚕滞育生物钟基因ea4的原核表达 | 第46-54页 |
| 1 材料与方法 | 第46-48页 |
| ·质粒、菌株 | 第46页 |
| ·SDS-PAGE 电泳相关试剂 | 第46-47页 |
| ·蛋白免疫杂交（Western blot）相关试剂 | 第47-48页 |
| ·酶和其他试剂 | 第48页 |
| 2 方法 | 第48-51页 |
| ·引物设计 | 第48页 |
| ·PCR 反应体系及条件设置 | 第48页 |
| ·大肠杆菌表达载体的构建 | 第48-49页 |
| ·诱导表达 | 第49页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第49-50页 |
| ·蛋白免疫杂交（Western Bloting） | 第50-51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-53页 |
| ·重组原核表达载体的鉴定 | 第51-52页 |
| ·EA4 蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第52-53页 |
| ·SDS-PAGE 分析及Western blotting 分析 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-54页 |
| 综合结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 攻读学位期间发表文章 | 第62-63页 |
| 攻读学位期间参加课题 | 第63-64页 |
| 附录一 测序图 | 第64-68页 |
| 附录二 质粒图谱 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 中文详细摘要 | 第70-71页 |
