| 1 引言 | 第1-14页 |
| ·国内外转基因紫花苜蓿研究进展 | 第9-11页 |
| ·植物遗传转化方法及其特点 | 第11-13页 |
| ·基因枪转化法 | 第12页 |
| ·激光微束穿刺法 | 第12-13页 |
| ·本实验研究内容和技术路线 | 第13页 |
| ·通过基因工程技术培养低木质素苜蓿品种的策略 | 第13页 |
| ·低木质素品种推广应用中可能存在的问题 | 第13-14页 |
| 2 材料和方法 | 第14-23页 |
| ·供试材料 | 第14-15页 |
| ·所用的试剂 | 第14页 |
| ·所用的培养基 | 第14页 |
| ·所用的缓冲液及其配制 | 第14-15页 |
| ·菌株、质粒和植物材料 | 第15页 |
| ·主要仪器设备 | 第15页 |
| ·4CL 基因的克隆载体T4CL 构建 | 第15-20页 |
| ·目的4CL 基因的获得 | 第15-18页 |
| ·紫花苜蓿总RNA 的提取 | 第15-16页 |
| ·反转录 | 第16页 |
| ·4CL 基因的PCR 扩增反应 | 第16-17页 |
| ·目的片断（4CL 基因）的回收 | 第17-18页 |
| ·目的片断与pGEM-T 克隆载体的连接 | 第18页 |
| ·连接产物的大肠杆菌感受态细胞中转化 | 第18-19页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞转化结果的检测——酶切检测 | 第19-20页 |
| ·小量碱法提取质粒 | 第19页 |
| ·重组质粒的酶切 | 第19-20页 |
| ·4CL 反义基因植物表达载体（TXCL 载体）的构建 | 第20页 |
| ·pB1121 植物表达载体的改造 | 第20页 |
| ·含有SacI 和XbaI 酶切位点的TXCL 载体和植物表达载体pB14CL 的构建 | 第20页 |
| ·紫花苜蓿遗传转化再生体系的研究 | 第20-23页 |
| ·无菌苗的培养 | 第20页 |
| ·培养基 | 第20页 |
| ·不定芽的诱导和分化 | 第20-21页 |
| ·受体材料的卡那霉素敏感性试验 | 第21页 |
| ·苜蓿子叶的高渗培养 | 第21页 |
| ·基因枪法受体材料的转化 | 第21-22页 |
| ·激光微束穿刺法受体材料的转化 | 第22-23页 |
| ·转基因低木质素再生植株的获得 | 第23页 |
| 3 结果与分析 | 第23-32页 |
| ·紫花苜蓿总RNA 的完整性及质量检测 | 第23-24页 |
| ·反转录PCR 检测 | 第24页 |
| ·T4CL 载体的构建与鉴定 | 第24-28页 |
| ·PCR 鉴定 | 第24-25页 |
| ·双酶切鉴定 | 第25页 |
| ·T4CL 重组质粒的测序 | 第25-28页 |
| ·TXCL 载体的检测 | 第28-29页 |
| ·酶切检测 | 第28页 |
| ·测序鉴定 | 第28-29页 |
| ·培养基的选择 | 第29页 |
| ·基因枪介导的苜蓿转化体系的优化 | 第29-31页 |
| ·苜蓿苗龄与基因枪转化效率的关系 | 第29页 |
| ·高渗处理对苜蓿子叶再生与转化率的影响 | 第29-30页 |
| ·苜蓿外植体预培养时间对转化频率的影响 | 第30-31页 |
| ·转化再生苗的PCR 检测 | 第31页 |
| ·转基因苜蓿再生苗 | 第31-32页 |
| 4 讨论 | 第32-36页 |
| ·关于引物设计中酶切位点的利用 | 第32页 |
| ·目的DNA 片段回收时注意事项 | 第32-33页 |
| ·关于pBIS(pBI 载体与低木质素基因重组子)启动子的特性和功能 | 第33页 |
| ·关于苜蓿遗传转化中分化培养基的配方 | 第33页 |
| ·关于苜蓿外植体的分化再生与遗传转化的关系 | 第33页 |
| ·关于苜蓿外源基因转化方法 | 第33-34页 |
| ·影响激光微束转化的因素 | 第34-35页 |
| ·组织培养过程中出现的现象及其解决措施 | 第35-36页 |
| 5 结论 | 第36-38页 |
| 致谢 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-43页 |
| 作者简介 | 第43页 |
