| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-44页 |
| 第一章 人类血红蛋白的结构和功能简介 | 第14-20页 |
| 1 正常人类血红蛋白的种类 | 第14页 |
| 2 人类血红蛋白的分子结构 | 第14-17页 |
| ·珠蛋白链的一级结构 | 第14-15页 |
| ·珠蛋白链的空间结构 | 第15-16页 |
| ·珠蛋白链与血红素的结合 | 第16-17页 |
| ·血红蛋白的四级结构 | 第17页 |
| 3 影响血红蛋白功能的效应物 | 第17-20页 |
| ·质子 | 第18页 |
| ·氨甲酰基加合体 | 第18-19页 |
| ·二磷酸甘油酸 | 第19-20页 |
| 第二章 人类珠蛋白基因结构及其表达调控 | 第20-29页 |
| 1 珠蛋白基因簇的结构特点 | 第20-21页 |
| 2 珠蛋白基因簇的基因表达调控 | 第21-29页 |
| ·基因座控制区 | 第22-23页 |
| ·顺式作用元件 | 第23-26页 |
| ·转录调控因子 | 第26-27页 |
| ·珠蛋白基因表达调控研究的模型 | 第27-29页 |
| 第三章 鱼类血红蛋白研究进展 | 第29-36页 |
| 1 无Hb的南极冰鱼 | 第29-30页 |
| 2 只表达1条珠蛋白链的七鳃鳗 | 第30页 |
| 3 黄尾平口石首鱼和蓝鳍金枪鱼具Root效应的Hb | 第30-33页 |
| ·黄尾平口石首鱼具Root效应的Hb | 第31页 |
| ·蓝鳍金枪鱼具Root效应的Hb | 第31-33页 |
| 4 鳗鲡目阴性和阳性Hb | 第33页 |
| 5 虹鳟鱼HbⅠ—Ⅳ | 第33-36页 |
| ·虹鳟鱼HbⅠ | 第34页 |
| ·虹鳟鱼Hb的多样性 | 第34-36页 |
| 第四章 鱼类珠蛋白基因研究进展 | 第36-44页 |
| 1 鲤形目的鲤鱼与斑马鱼 | 第37-39页 |
| ·鲤鱼 | 第37-38页 |
| ·斑马鱼 | 第38-39页 |
| 2 红鳍东方豚 | 第39-40页 |
| 3 青鳉 | 第40-41页 |
| 4 南极鱼类 | 第41-44页 |
| 第二部分 研究内容 | 第44-98页 |
| 第五章 大黄鱼α-和β-珠蛋白基因的克隆及其链接方式的初步分析 | 第45-65页 |
| 1 材料 | 第46页 |
| ·实验鱼 | 第46页 |
| ·菌株和质粒 | 第46页 |
| ·工具酶与试剂 | 第46页 |
| 2 方法 | 第46-52页 |
| ·引物设计 | 第46-47页 |
| ·大黄鱼脾脏总RNA的提取 | 第47页 |
| ·反转录 | 第47-48页 |
| ·大黄鱼β_1-珠蛋白基因cDNA部分序列的克隆 | 第48页 |
| ·3′-RACE PCR | 第48-49页 |
| ·珠蛋白基因cDNA的T-A克隆 | 第49-51页 |
| ·大黄鱼肝脏基因组提取 | 第51页 |
| ·α-和β-珠蛋白基因的扩增 | 第51-52页 |
| ·α-和β-珠蛋白基因链接分析 | 第52页 |
| ·序列测定及分析 | 第52页 |
| 3 结果 | 第52-61页 |
| ·β_1-珠蛋白基因cDNA核苷酸和推导的氨基酸序列 | 第52-56页 |
| ·α-珠蛋白基因cDNA核苷酸和推导的氨基酸序列 | 第56-60页 |
| ·大黄鱼α-和β_2-珠蛋白基因核苷酸序列 | 第60-61页 |
| ·大黄鱼α-和β-珠蛋白基因的链接方向 | 第61页 |
| 4 讨论 | 第61-65页 |
| ·大黄鱼α-和β_1-珠蛋白的特点 | 第61-62页 |
| ·大黄鱼珠蛋白基因的多态性 | 第62-63页 |
| ·大黄鱼α-和β-珠蛋白基因的链接分析 | 第63-65页 |
| 第六章 美国红鱼珠蛋白链的分离及其α-和β-珠蛋白基因的克隆 | 第65-77页 |
| 1 材料与方法 | 第66-67页 |
| ·实验材料 | 第66页 |
| ·质粒、菌株和生化试剂 | 第66页 |
| ·常用缓冲液及培养基试剂配制 | 第66-67页 |
| 2 方法 | 第67-69页 |
| ·血红蛋白的提取 | 第67页 |
| ·珠蛋白链的分离 | 第67页 |
| ·总RNA的提取与反转录 | 第67页 |
| ·扩增美国红鱼α-和β-珠蛋白基因cDNA | 第67-68页 |
| ·美国红鱼肝脏基因组提取 | 第68页 |
| ·扩增美国红鱼β-珠蛋白基因 | 第68页 |
| ·紧密链锁的α-和β-珠蛋白基因间序列的扩增 | 第68页 |
| ·PCR产物序列测定 | 第68-69页 |
| ·测序结果分析和与其它物种序列的比较 | 第69页 |
| 3 结果 | 第69-73页 |
| ·珠蛋白链分离 | 第69页 |
| ·α-珠蛋白基因cDNA核菅酸和推导的氨基酸序列分析 | 第69-71页 |
| ·β_1-珠蛋白基因cDNA核苷酸和推导的氨基酸序列 | 第71-72页 |
| ·β-珠蛋白基因核苷酸序列 | 第72-73页 |
| ·紧密链锁的α-和β-珠蛋白基因间序列 | 第73页 |
| 4 讨论 | 第73-77页 |
| ·美国红鱼珠蛋白肽链的分离 | 第73-74页 |
| ·美国红鱼和大黄鱼珠蛋白氨基酸序列比较分析 | 第74页 |
| ·美国红鱼β_1-和β_2-珠蛋白基因核苷酸序列比较分析 | 第74-75页 |
| ·紧密链接的α-和β-珠蛋白基因间序列分析 | 第75-77页 |
| 第七章 三种石首鱼珠蛋白基因复合体序列比较及大黄鱼基因间序列调控功能的初步鉴定 | 第77-87页 |
| 1 材料 | 第78页 |
| ·实验材料 | 第78页 |
| ·菌株和质粒 | 第78页 |
| ·工具酶与试剂 | 第78页 |
| 2 方法 | 第78-82页 |
| ·肌肉基因组提取 | 第78页 |
| ·珠蛋白基因复合体的扩增 | 第78-80页 |
| ·表达载体pInter/EGFP的构建 | 第80页 |
| ·转染级超纯度真核表达质粒的制备 | 第80-81页 |
| ·脂质体介导质粒转染Vero细胞 | 第81-82页 |
| ·PCR产物序列测定 | 第82页 |
| ·测序结果分析和与其它物种序列的比较 | 第82页 |
| 3 结果 | 第82-85页 |
| ·大黄鱼、美国红鱼、鮸状黄姑鱼珠蛋白基因复合体序列 | 第82-84页 |
| ·报告基因载体pInter/EGFP的构建 | 第84-85页 |
| ·荧光检测 | 第85页 |
| 4 讨论 | 第85-87页 |
| ·石首鱼珠蛋白基因复合体序列的特点 | 第85-86页 |
| ·大黄鱼紧密连锁的α-和β_2-珠蛋白基因间序列启动子功能的初步鉴定 | 第86-87页 |
| 第八章 三种石首鱼珠蛋白基因复合体基因间序列启动子活性比较和大黄鱼B_2-珠蛋白基因内含子1的调控功能鉴定 | 第87-98页 |
| 1 材料 | 第88页 |
| ·实验鱼 | 第88页 |
| ·菌株和质粒 | 第88页 |
| ·工具酶与试剂 | 第88页 |
| ·主要仪器 | 第88页 |
| 2 方法 | 第88-91页 |
| ·表达载体pCroaker,pCuneate和pRedrum的构建 | 第88-89页 |
| ·表达载体pIntergene的构建 | 第89页 |
| ·表达载体pIntronInter的构建 | 第89页 |
| ·表达载体pInterIntron的构建 | 第89-90页 |
| ·转染级超纯度真核表达质粒的制备 | 第90页 |
| ·鲫鱼红细胞的提取 | 第90页 |
| ·脂质体介导重组质粒转染鲫鱼红细胞 | 第90页 |
| ·荧光素酶活性测定法 | 第90-91页 |
| 3 结果 | 第91-95页 |
| ·真核表达载体pCroaker,pCuneate和pRedrum的构建及鉴定 | 第91-92页 |
| ·重组载体转染Vero细胞后荧光素酶的相对活性分析 | 第92-93页 |
| ·真核表达载体pIntergene的构建及鉴定 | 第93-94页 |
| ·真核表达载体pIntronInter的构建及鉴定 | 第94页 |
| ·真核表达载体pInterIntron的构建及鉴定 | 第94-95页 |
| ·重组载体转染红细胞后荧光素酶的相对活性分析 | 第95页 |
| 4 讨论 | 第95-98页 |
| ·三种石首鱼紧密连锁的α-和β-珠蛋白基因间序列启动子活性强弱比较 | 第95-96页 |
| ·大黄鱼β_2-珠蛋白基因内含子1调控活性分析 | 第96-98页 |
| 第三部分 总结与展望 | 第98-100页 |
| 1 结论与主要创新点 | 第99页 |
| 2 不足与展望 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-109页 |
| 第四部分 附录 | 第109-113页 |
| 附录1 常用试剂及缓冲液 | 第110-112页 |
| 附录2 攻读博士学位期间发表和录用的学术论文 | 第112-113页 |
| 致谢 | 第113页 |
