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重组葡激酶突变体生产工艺及质量研究

中文摘要第1-3页
ABSTRACT第3-9页
前言第9-11页
第一章 文献综述第11-20页
   ·人体内血栓形成与溶栓药物第11-15页
     ·人体内血栓形成与溶解的概况第11页
     ·溶栓制剂的的研究概况第11-12页
     ·葡激酶的研究进展第12-15页
   ·大肠杆菌发酵工艺的优化第15-20页
     ·培养基第15-17页
     ·培养条件的影响第17-18页
     ·基因工程菌的高密度发酵培养第18-20页
第二章 大肠杆菌发酵培养基的优化研究第20-40页
   ·实验材料与仪器第20-22页
     ·实验材料第20-21页
     ·实验仪器第21-22页
   ·实验方法第22-27页
     ·试剂的配制第22-24页
     ·培养方法第24页
     ·SDS-PAGE 方法第24页
     ·rSAK 蛋白含量测定(Lowry 法)第24-25页
     ·测定还原糖第25-26页
     ·测定氨基氮第26-27页
     ·细胞干重的测定第27页
   ·结果与讨论第27-39页
     ·培养基种类对rSAK 表达的影响第27-28页
     ·M9 培养基的优化第28-37页
     ·镁含量的优化第37-38页
     ·优化培养基中大肠杆菌 DH5α/pBV220 的优化第38-39页
   ·小结第39-40页
第三章 大肠杆菌生产rSAK 的摇瓶发酵工艺研究第40-55页
   ·实验材料与仪器第40-41页
     ·实验材料第40-41页
     ·实验仪器第41页
   ·实验方法第41-43页
     ·试剂的配制第41-42页
     ·培养方法第42页
     ·SDS-PAGE 方法第42页
     ·rSAK 蛋白含量测定(Lowry 法)第42页
     ·测定还原糖第42页
     ·测定氨基氮第42-43页
     ·细胞干重的测定第43页
   ·结果与讨论第43-54页
     ·温度对大肠杆菌生长和rSAK 表达的影响第43-47页
     ·pH 值对大肠杆菌生长和rSAK 表达的影响第47-48页
     ·种子菌龄对大肠杆菌生长和rSAK 表达的影响第48-49页
     ·接种量对大肠杆菌生长和rSAK 表达的影响第49页
     ·摇瓶溶氧对大肠杆菌生长和rSAK 表达的影响第49-51页
     ·优化条件下大肠杆菌 DH5α/pBV220/rSAK 的培养第51-54页
   ·小结第54-55页
第四章 大肠杆菌在发酵罐上的间歇培养研究第55-66页
   ·实验材料与仪器第55-57页
     ·实验材料第55-56页
     ·实验仪器第56-57页
   ·实验方法第57-59页
     ·试剂的配制第57页
     ·培养方法第57-58页
     ·SDS-PAGE 方法第58页
     ·rSAK 蛋白含量测定(Lowry 法)第58页
     ·测定还原糖第58页
     ·测定氨基氮第58页
     ·细胞干重的测定第58-59页
   ·结果与讨论第59-64页
     ·溶氧(DO)对菌体生长和rSAK 表达的影响第59-60页
     ·接种量对菌体生长和rSAK 表达的影响第60-61页
     ·诱导时机的选择第61-63页
     ·优化条件下的间歇培养第63-64页
   ·小结第64-66页
第五章 中试制备的rSAK 蛋白质量研究第66-83页
   ·实验材料与仪器第66-67页
     ·实验材料第66-67页
     ·实验仪器第67页
   ·实验方法第67-69页
     ·SDS-PAGE 电泳测定纯度和分子量第67-68页
     ·RP-HPLC 测定纯度第68页
     ·rSAK 蛋白含量测定(Lowry 法)第68页
     ·rSAK 蛋白工程菌菌体蛋白残留量测定第68页
     ·rSAK 蛋白细菌内毒素测定第68页
     ·rSAK 蛋白等电点(PI)测定第68-69页
     ·紫外光谱扫描第69页
     ·免疫印迹第69页
     ·外源残余DNA含量测定第69页
     ·生物学活性和比活性测定第69页
     ·N’-末端氨基酸序列测定第69页
   ·结果与讨论第69-82页
     ·SDS-PAGE 电泳测定纯度和分子量第69-72页
     ·RP-HPLC 测定纯度第72-73页
     ·rSAK 蛋白含量测定(Lowry 法)第73页
     ·rSAK 蛋白工程菌菌体蛋白残留量测定第73-74页
     ·rSAK 蛋白细菌内毒素测定第74页
     ·rSAK 蛋白等电点(PI)测定第74-75页
     ·紫外光谱扫描第75-76页
     ·免疫印迹第76页
     ·外源残余DNA含量测定第76-77页
     ·生物学活性和比活性测定第77-78页
     ·N’-末端氨基酸序列测定第78-82页
   ·小结第82-83页
第六章 结论与展望第83-85页
   ·结论第83-84页
   ·对今后工作的建议第84-85页
参考文献第85-92页
发表论文情况第92-93页
附录第93-99页
致谢第99页

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