| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 缩写目录(aubrcviation) | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-17页 |
| 1．1 猪萎缩性鼻炎及其危害 | 第10-11页 |
| 1．2 猪萎缩性鼻炎的病原学 | 第11-12页 |
| 1．3 产毒多杀性巴氏杆菌毒素的生物学特性 | 第12-14页 |
| 1．4 猪进行性萎缩性鼻炎的检测方法 | 第14-15页 |
| 1．5 猪进行性萎缩性鼻炎疫苗的发展 | 第15-17页 |
| 2 研究目的和意义 | 第17-19页 |
| 3 材料与方法 | 第19-28页 |
| 3．1 材料 | 第19-21页 |
| 3．1．1 实验用培养基 | 第19页 |
| 3．1．2 相关质粒、载体、菌株及阳性血清 | 第19页 |
| 3．1．3 各种酶、试剂盒及常用试剂 | 第19-20页 |
| 3．1．4 质粒提取液、SDS-PAGE、Westen blot及包涵体提取相关溶液 | 第20页 |
| 3．1．5 ELISA相关溶液 | 第20页 |
| 3．1．6 本实验所用的PCR引物 | 第20页 |
| 3．1．7 动物试验所用物品及试验动物 | 第20-21页 |
| 3．2 方法 | 第21-28页 |
| 3．2．1 T~+Pm基因组提取 | 第21页 |
| 3．2．2 小规模提取质粒 | 第21页 |
| 3．2．3 基因的扩增 | 第21-22页 |
| 3．2．4 基因的克隆及序列测定 | 第22页 |
| 3．2．5 重组质粒的诱导表达、样品处理及 SDS-PAGE电泳 | 第22-23页 |
| 3．2．6 表达蛋白可溶性分析及最佳表达条件的优化 | 第23页 |
| 3．2．7 包涵体的提取及蛋白纯化 | 第23页 |
| 3．2．8 Western blot检测 | 第23-24页 |
| 3．2．9 间接 ELISA方法的初步建立 | 第24页 |
| 3．2．10 重组表达质粒pGEX-toxA表达产物小鼠攻毒试验 | 第24-25页 |
| 3．2．11 制备毒素 N端和 C端蛋白的兔抗血清 | 第25页 |
| 3．2．12 T~+Pm HN-13细菌生长曲线的绘制 | 第25-26页 |
| 3．2．13 猪进行性萎缩性鼻炎类毒素菌苗的制备 | 第26页 |
| 3．2．14 本动物试验 | 第26-28页 |
| 4． 结果与分析 | 第28-38页 |
| 4．1 toxA基因的克隆、序列分析及原核表达 | 第28-30页 |
| 4．1．1 toxA基因的克隆、序列分析 | 第28-29页 |
| 4．1．2 toxA基因的原核表达及 Western blot检测 | 第29-30页 |
| 4．2 toxA基因的亚克隆与表达 | 第30-31页 |
| 4．3 表达蛋白可溶性分析及最佳表达条件优化结果 | 第31-32页 |
| 4．3．1 表达蛋白可溶性分析结果 | 第31页 |
| 4．3．2 最佳表达条件优化结果 | 第31-32页 |
| 4．4 间接 ELISA检测方法的初步建立 | 第32-33页 |
| 4．5 重组表达质粒pGEX-toxA表达产物小鼠攻毒试验结果 | 第33页 |
| 4．6 兔抗血清制备及琼脂扩散试验结果 | 第33-34页 |
| 4．7 T~+Pm HN-13细菌生长曲线的绘制 | 第34-35页 |
| 4．8 试验用疫苗质量检测结果 | 第35页 |
| 4．8．1 无菌检测结果 | 第35页 |
| 4．8．2 试验用疫苗乳化检测结果 | 第35页 |
| 4．9 本动物试验结果 | 第35-38页 |
| 5 讨论 | 第38-43页 |
| 5．1 toxA基因克隆与表达 | 第38页 |
| 5．2 toxA基因表达产物生物学活性检测 | 第38-39页 |
| 5．2．1 Western blot检测 | 第38页 |
| 5．2．2 昆明小鼠致死试验 | 第38-39页 |
| 5．3 toxA基因亚克隆表达及生物学活性检测 | 第39-40页 |
| 5．4 间接 ELISA检测方法的初步建立及检测结果分析 | 第40页 |
| 5．5 兔抗血清制备及琼脂双向扩散试验结果 | 第40-41页 |
| 5．6 T~+Pm HN-13细菌生长曲线绘制结果 | 第41页 |
| 5．7 猪进行萎缩性鼻炎本动物试验结果 | 第41-43页 |
| 6 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 附录 | 第50页 |
