| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-13页 |
| 第一章 锌指蛋白研究概况 | 第13-33页 |
| 1.前言 | 第13-14页 |
| 2.锌指蛋白的分类 | 第14页 |
| 3.C_2H_2锌指蛋白基因的分子生物学特征 | 第14-24页 |
| ·C2H2锌指结构域结构特征 | 第14-16页 |
| ·锌指结构域的核酸识别特异性 | 第16-20页 |
| ·C2H2型锌指蛋白中最常见的效应功能域：KRAB结构域 | 第20-21页 |
| ·KRAB结构域的转录抑制功能 | 第21-24页 |
| 4.C_2H_2型锌指蛋白的生物学功能 | 第24-26页 |
| ·C_2H_2型锌指蛋白与胚胎发育 | 第24-25页 |
| ·C_2H_2型锌指蛋白与细胞增殖和分化 | 第25页 |
| ·C_2H_2型锌指蛋白与疾病 | 第25-26页 |
| 5.锌指蛋白的人工设计及应用 | 第26-33页 |
| 第二章 人胚C_2H_2型锌指富集cDNA质粒文库的构建 | 第33-44页 |
| 0 引言 | 第33-34页 |
| 1 材料与方法 | 第34-41页 |
| ·材料与试剂 | 第34-36页 |
| ·电转化大肠杆菌细胞的制备 | 第36页 |
| ·人胚总RNA的制备与DNasel消化 | 第36页 |
| ·C2H2型锌指基因富集策略与流程 | 第36-38页 |
| ·SMART cDNA文库的构建与分析 | 第38-41页 |
| 2 结果与讨论 | 第41-44页 |
| 第三章 新基因hKid3的RACE及核酸与氨基酸全序列分析 | 第44-57页 |
| 0 引言： | 第44-45页 |
| 1 材料与方法 | 第45-49页 |
| ·材料与试剂 | 第45-46页 |
| ·基因特异引物的设计与合成 | 第46页 |
| ·hKid3的5’RACE | 第46-48页 |
| ·拼接的hKid3 cDNA序列的生物信息学分析 | 第48-49页 |
| 2 结果 | 第49-55页 |
| ·5’RACE获得约400bp cDNA片段。 | 第49页 |
| ·hKid3 cDNA及翻译蛋白质序列的特征分析 | 第49-51页 |
| ·hKid3基因组结构分析 | 第51-52页 |
| ·hKid3属于Kid锌指亚家族 | 第52页 |
| ·Kid锌指亚家族的多序列比对及保守的退化锌指的发现 | 第52-55页 |
| ·进化树分析 | 第55页 |
| 3.讨论 | 第55-57页 |
| 第四章 hKid3的表达谱与细胞定位分析 | 第57-71页 |
| 0 引言： | 第57-58页 |
| 1 材料与方法 | 第58-65页 |
| ·材料与试剂 | 第58-60页 |
| ·引物设计与合成 | 第60页 |
| ·Northern杂交 | 第60-62页 |
| ·GFP融合蛋白表达载体的构建 | 第62-63页 |
| ·细胞培养及转染 | 第63-65页 |
| 2 结果 | 第65-68页 |
| ·hKid3在人胚胎与成人各组织中的表达 | 第65-66页 |
| ·hKID3蛋白定位于细胞核中 | 第66-68页 |
| 3 讨论 | 第68-71页 |
| ·KRAB-ZNFs的表达谱特征与hKid3的表达谱分析 | 第68-69页 |
| ·hKID3蛋白的核定位分析 | 第69-71页 |
| 第五章 hKID3的KRAB结构域的转录抑制作用 | 第71-81页 |
| 0 引言： | 第71-73页 |
| 1 材料与方法 | 第73-77页 |
| ·材料与试剂 | 第73-74页 |
| ·引物设计与合成v62 | 第74页 |
| ·GAL4-DBD融合蛋白表达载体的构建 | 第74-75页 |
| ·CAT分析用质粒的转染 | 第75-76页 |
| ·报告基因CAT的活性检测 | 第76页 |
| ·β—gal活性检测 | 第76-77页 |
| 2 结果 | 第77-79页 |
| ·GAL4-DBD融合蛋白表达载体的构建与鉴定 | 第77-78页 |
| ·CAT报告基因实验证实KRAB结构域的转录抑制作用 | 第78-79页 |
| 3 讨论 | 第79-81页 |
| 第六章 GST融合的hKID3锌指结构域的表达、纯化与DNA结合特征分析 | 第81-101页 |
| 0 引言： | 第81-83页 |
| 1 材料与方法 | 第83-91页 |
| ·材料与试剂 | 第83-84页 |
| ·引物设计与合成 | 第84-85页 |
| ·重组表达载体pGEX-hKid3ZF的构建 | 第85-87页 |
| ·GSH亲合层析胶的制备 | 第87页 |
| ·hKid3完整锌指结构域的GST融合蛋白GST-ZF的表达 | 第87-88页 |
| ·GST-ZF融合蛋白的亲合层析纯化、浓缩与定量 | 第88-89页 |
| ·随机寡核苷酸双链DNA库中筛选hKID3靶序列 | 第89-90页 |
| ·电泳迁移率变动分析(EMSA) | 第90-91页 |
| 2.结果 | 第91-97页 |
| ·重组表达载体pGEX-hKid3ZF的构建 | 第91-92页 |
| ·GST-ZF融合蛋白的表达和纯化 | 第92-94页 |
| ·GST-ZF融合蛋白筛选出DNA靶序列5’-CCAC(c/g)-3’ | 第94-95页 |
| ·EMSA检测GST-ZF融合蛋白与DNA靶序列的特异性结合 | 第95-97页 |
| 3.讨论 | 第97-101页 |
| ·hKID3特异性结合的DNA靶序列 | 第97-98页 |
| ·DNA结合蛋白的特异性识别靶序列的鉴定方法 | 第98-99页 |
| ·电泳迁移率变动分析的条件优化 | 第99-101页 |
| 研究总结 | 第101-103页 |
| 参考文献 | 第103-119页 |
| 研究生期间发表的论文 | 第119-120页 |
| 致谢 | 第120页 |
