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水稻穗颈伸长基因EUI2(t)的精细定位与克隆

摘要第1-9页
ABSTRACT第9-11页
缩略词第11-13页
前言第13-15页
第一章 文献综述第15-40页
 1 水稻穗颈伸长基因的研究进展第15-19页
   ·水稻长穗颈种质的发现第15-16页
   ·长穗颈基因eui的遗传分析及基因定位第16-17页
   ·长穗颈基因eui突变体生理研究第17-18页
   ·长穗颈基因eui种质的育种应用第18-19页
 2 赤霉素与植物器官伸长的关系第19-27页
   ·赤霉素的结构和分布第19-20页
   ·赤霉素的生物合成第20页
   ·赤霉素的作用机理第20-21页
   ·植物器官伸长相关基因的克隆第21-27页
     ·合成赤霉素的关键酶的克隆与研究第22-24页
     ·赤霉素的信号转导第24-27页
 3 分子标记技术及其在水稻上的应用第27-34页
   ·分子标记的种类第27-31页
     ·以分子杂交技术为基础的分子标记第27-28页
     ·以PCR为基础的分子标记第28-31页
   ·分子标记在水稻遗传研究中的应用第31-34页
     ·水稻分子遗传连锁图谱的构建第31-32页
     ·水稻基因的定位第32-33页
     ·水稻基因的克隆第33页
     ·分子标记在水稻育种上的应用第33-34页
 4 植物基因克隆技术及其发展第34-40页
   ·通过已知基因产物分析和鉴定第34-35页
   ·通过遗传表型分析第35页
     ·基因标鉴法第35页
     ·激发子的寄主受体基因克隆技术第35页
   ·以图谱为基础的定位克隆技术第35-37页
     ·图位克隆的方法第35-36页
     ·图位克隆技术的新发展第36页
     ·水稻图位克隆的进展第36-37页
   ·从研究缺失突变体的表型着手分离基因第37-38页
     ·核DNA消减法第37页
     ·核DNA消减PCR法第37页
     ·从大的基因组区域直接分离编码序列第37-38页
   ·通过研究mRNA差异表达筛选克隆基因第38-39页
   ·表型克隆法第39-40页
第二章 水稻穗颈伸长基因EUI2(t)的精细定位第40-47页
 1 材料与方法第40-41页
   ·材料第40页
   ·方法第40-41页
     ·水稻DNA的提取第40页
     ·引物来源及新引物设计第40-41页
     ·PCR扩增及其产物检测第41页
     ·连锁分析第41页
 2 结果与分析第41-46页
   ·对EUI2(t)基因初步定位结果的验证第41页
   ·EUI2(t)基因另一侧标记的获得第41-43页
   ·目的基因所在区域的精细遗传图谱和物理图谱的构建第43-45页
   ·定位区段候选基因的分析第45-46页
 3 讨论第46-47页
第三章 水稻穗颈伸长基因EUI2(t)的克隆第47-64页
 1 材料与方法第47-49页
   ·材料第47页
   ·方法第47-49页
     ·等位性测验第47页
     ·水稻总DNA的提取第47页
     ·以水稻基因组DNA扩增目的基因第47-48页
     ·水稻穗颈总RNA的提取第48页
     ·cDNA的合成第48页
     ·以cDNA为模板扩增目的基因第48-49页
     ·PCR产物的酶切和电泳检测第49页
     ·PCR产物的回收与克隆第49页
     ·DNA序列测定第49页
 2 结果与分析第49-58页
   ·三个eui2(t)突变体与协青早eB2的等位性测验第49-50页
   ·eui2(t)突变体突变位点的检测第50-54页
     ·从基因组扩增候选基因第50-51页
     ·PCR产物的酶切及聚丙烯酰胺凝胶电泳第51-52页
     ·候选基因的测序结果第52-54页
   ·目的基因在突变体和野生型间的表达第54-57页
     ·参照物的RT-PCR定量分析第54页
     ·候选cDNA片段差异表达检测分析结果第54-55页
     ·候选cDNA片段酶切后电泳的结果第55-56页
     ·候选cDNA片段测序结果第56-57页
   ·EUI2(t)基因的序列分析第57-58页
 3 讨论第58-64页
   ·图位克隆方法的改进第58-59页
   ·植物茎秆伸长的机理第59-60页
   ·EUI2(t)基因的表达机理第60-61页
   ·Co60-γ射线诱导基因突变的机理第61-62页
   ·EUI2(t)基因的应用第62-63页
   ·对EUI2(t)基因研究的展望第63-64页
附录A 水稻DNA的微量提取第64-65页
附录B 非变性聚丙稀酰胺凝胶电泳的方法第65-66页
附录C PCR产物的回收与克隆第66-69页
附录D 水稻总RNA的提取与纯化第69-71页
附录E CDNA第一链的合成第71-72页
附录F 几种环氧化物酶的氨基酸序列比较图第72-73页
参考文献第73-81页
致谢第81页

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