| 符号说明 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 材料与方法 | 第12-24页 |
| 1 材料 | 第12-15页 |
| 1．1 TAT-NLS序列、F3序列及引物合成序列与测序 | 第12-13页 |
| 1．1．1 TAT-NLS序列 | 第12页 |
| 1．1．2 F3序列 | 第12-13页 |
| 1．1．3 扩增eGFP的引物 | 第13页 |
| 1．2 细胞株、菌株、质粒 | 第13页 |
| 1．3 分子生物学工具酶 | 第13页 |
| 1．4 细胞培养用品 | 第13-14页 |
| 1．5 蛋白质纯化材料 | 第14页 |
| 1．6 蛋白质罗丹明标记 | 第14页 |
| 1．7 其他常规试剂、无机盐 | 第14页 |
| 1．8 常用缓冲液及细菌培养基LB | 第14页 |
| 1．9 实验仪器 | 第14-15页 |
| 2 方法 | 第15-24页 |
| 2．1 各合成片段的连接 | 第15-16页 |
| 2．2 PCR扩增eGFP基因 | 第16页 |
| 2．3 质粒载体的构建 | 第16-19页 |
| 2．3．1 含TAT-NLS质粒pET-TAT-NLS的构建 | 第16-17页 |
| 2．3．2 含F3质粒pET-F3的构建 | 第17-18页 |
| 2．3．3 原核表达载体pET-TAT-NLS-eGFP、pET-F3-eGFP和pET-eGFP的构建 | 第18-19页 |
| 2．4 重组融合蛋白及eGFP蛋白在大肠杆菌中的诱导表达 | 第19页 |
| 2．5 目的蛋白在细菌细胞中位置的鉴定 | 第19页 |
| 2．6 可溶表达上清的制备 | 第19-20页 |
| 2．7 目的蛋白的纯化 | 第20页 |
| 2．8 融合蛋白的浓缩 | 第20-21页 |
| 2．9 罗丹明标记蛋白质 | 第21页 |
| 2．10 蛋白质浓度测定 | 第21-22页 |
| 2．11 细胞培养 | 第22页 |
| 2．12 细胞转导试验融合蛋白的准备 | 第22页 |
| 2．13 融合蛋白对体外培养细胞的转导试验 | 第22-24页 |
| 2．13．1 融合蛋白TAT-NLS-eGFP在体外对细胞的转导 | 第22-23页 |
| 2．13．2 融合蛋白F3-eGFP在体外对细胞的转导 | 第23-24页 |
| 结果 | 第24-41页 |
| 1 非病毒载体融合蛋白基因TAT-NLS-eGFP的克隆、表达与纯化 | 第24-30页 |
| 1．1 融合蛋白基因TAT-NLS-eGFP的克隆 | 第24-28页 |
| 1．1．1 质粒pET-TAT-NLS的构建 | 第24-25页 |
| 1．1．2 PCR扩增绿色荧光蛋白基因eGFP | 第25-26页 |
| 1．1．3 表达载体pET-TAT-NLS-eGFP的构建 | 第26-27页 |
| 1．1．4 表达载体pET-TAT-NLS-eGFP的测序鉴定 | 第27-28页 |
| 1．2 融合蛋白TAT-NLS-eGFP的诱导表达与纯化 | 第28-30页 |
| 2 非病毒载体融合蛋白基因F3-eGFP的克隆、表达与纯化 | 第30-35页 |
| 2．1 融合蛋白基因F3-eGFP的克隆 | 第30-35页 |
| 2．1．1 质粒pET-F3的构建 | 第30-31页 |
| 2．1．2 表达载体pET-F3-eGFP的构建 | 第31-32页 |
| 2．1．3 表达载体pET-F3-eGFP的测序鉴定 | 第32-33页 |
| 2．1．4 融合蛋白F3-eGFP的诱导表达与纯化 | 第33-35页 |
| 3 非病毒载体融合蛋白对体外培养细胞的转导实验 | 第35-41页 |
| 3．1 融合蛋白TAT-NLS-eGFP的细胞转导实验 | 第35-37页 |
| 3．2 融合蛋白F3-eGFP的细胞转导实验 | 第37-38页 |
| 3．3 罗丹明标记的融合蛋白F3-eGFP的细胞转导实验 | 第38-41页 |
| 讨论 | 第41-48页 |
| 1 非病毒载体融合蛋白基因TAT-NLS-eGFP/F3-eGFP的克隆、表达与纯化 | 第41-44页 |
| 2 融合蛋白TAT-NLS-eGFP和F3-eGFP可以有效地转导体外培养的肿瘤细胞 | 第44-48页 |
| 参考文献 | 第48-51页 |
| 综述 | 第51-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文目录 | 第59页 |
