| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一部分 前言 | 第8-19页 |
| 1 抗菌肽的概念和分类 | 第8页 |
| 2 抗菌肽活性及作用机理 | 第8-13页 |
| ·抗菌肽的膜活性 | 第9-11页 |
| ·抗菌肽的抗病毒作用及其机理 | 第11-12页 |
| ·抗菌肽抗寄生虫的作用及其机理 | 第12页 |
| ·抗菌肽对肿瘤细胞及癌实体瘤的作用及其机理 | 第12-13页 |
| ·其他的作用机制 | 第13页 |
| 3 Cecropin、Magainin、Melittin | 第13-16页 |
| ·天蚕素(cecropin) | 第13-14页 |
| ·蛙皮素(magainin) | 第14-15页 |
| ·蜂毒素(melittin) | 第15-16页 |
| 4 论文背景、思路及技术路线 | 第16-19页 |
| 第二部分 融合有酸性片段的天蚕素A-蜂毒素串连重复基因的构建 | 第19-35页 |
| 1 基因和接头的的设计和合成 | 第19-21页 |
| 2 实验材料 | 第21-23页 |
| ·菌株、质粒、引物、基因片段 | 第21-22页 |
| ·工具酶和主要试剂 | 第22页 |
| ·溶液和培养基 | 第22页 |
| ·主要仪器 | 第22-23页 |
| 3 实验方法: | 第23-31页 |
| ·融合肽基因的串连 | 第23-27页 |
| ·质粒pUC19的制备、双酶切及连接产物的双酶切: | 第27-29页 |
| ·外源基因和载体的连接 | 第29页 |
| ·E.coli感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
| ·转化 | 第30页 |
| ·转化子的快速鉴定 | 第30-31页 |
| 4 实验结果: | 第31-35页 |
| ·融合肽完整基因的连接及多拷贝串联重复基因的连接 | 第31-32页 |
| ·转化子的鉴定: | 第32-35页 |
| 第三部分 CA-ME串连重复基因的表达和纯化 | 第35-49页 |
| 1 实验材料 | 第35-37页 |
| ·基因、菌株、质粒 | 第35页 |
| ·工具酶和主要试剂 | 第35页 |
| ·主要溶液和培养基 | 第35-37页 |
| 2 实验方法: | 第37-42页 |
| ·重组表达质粒的构建和鉴定: | 第37-38页 |
| ·5×CA-ME的表达检测 | 第38-39页 |
| ·5×CA-ME的表达动态 | 第39页 |
| ·5×CA-ME表达产物的可溶性分析及包涵体的溶解 | 第39-40页 |
| ·表达产物的Poly-His protein purification纯化 | 第40页 |
| ·溴化氰(CNBr)处理纯化蛋白 | 第40-41页 |
| ·CM离子交换层析 | 第41页 |
| ·纯化产物抗菌活性检测: | 第41-42页 |
| 3 实验结果 | 第42-49页 |
| ·重组表达质粒的构建和鉴定 | 第42-44页 |
| ·5×CA-ME的表达检测 | 第44-45页 |
| ·5×CA-ME的表达动态 | 第45-46页 |
| ·5×CA-ME表达产物的可溶性分析及包涵体的溶解 | 第46页 |
| ·表达产物的Poly-His protein purification纯化 | 第46-47页 |
| ·溴化氰(CNBr)处理纯化蛋白 | 第47页 |
| ·CM离子交换层析 | 第47-48页 |
| ·纯化产物抗菌活性检测: | 第48-49页 |
| 第四部分 讨论 | 第49-53页 |
| 1 串联重复基因的构建 | 第49-50页 |
| 2 大肠杆菌表达体系中重组蛋白以包涵体形式存在的纯化的研究 | 第50-52页 |
| 3 小分子电泳 | 第52-53页 |
| 小结 | 第53-57页 |
| 附录 | 第57-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
