| 摘要 | 第1-6页 |
| 1 钙激活中性蛋白酶及其基因克隆的研究进展 | 第6-17页 |
| ·嫩度决定肉的品质 | 第6页 |
| ·关于钙激活中性蛋白酶系统 | 第6页 |
| ·μ-calpain在肉嫩化过程中的作用 | 第6-10页 |
| ·在动物屠宰后肌肉的熟化过程中钙激活中性蛋白酶系统所发挥的作用 | 第10-13页 |
| ·m-calpain是否会引起动物死后肌肉的嫩化 | 第11-12页 |
| ·μ-calpain是否会引起动物死后肌肉的嫩化 | 第12-13页 |
| ·为提高肌肉的嫩度而进行的尝试 | 第13-15页 |
| ·通过调节动物死后早期时的pH值与延长死后肌肉的熟化时间来提高肉的嫩度 | 第13页 |
| ·通过在冰箱中冻存前冷冻与在冰箱中冻存后注射氯化钙的方法来提高肉的嫩度 | 第13-14页 |
| ·通过电流刺激来提高肌肉的嫩度 | 第14页 |
| ·利用维生素D3来提高牛肉的嫩度 | 第14-15页 |
| ·有关μ-calpain与m-calpain基因克隆与分析的研究进展 | 第15-17页 |
| ·关于μ-calpain基因的克隆与分析 | 第15-16页 |
| ·关于CAPN1基因的定位 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-30页 |
| ·材料 | 第17-19页 |
| ·试剂以及酶制剂 | 第17-18页 |
| ·溶液 | 第18页 |
| ·缓冲液 | 第18页 |
| ·菌株和载体 | 第18页 |
| ·引物 | 第18-19页 |
| ·仪器设备 | 第19页 |
| ·方法 | 第19-30页 |
| ·样品的采集 | 第19页 |
| ·牦牛肌肉组织总RNA的提取 | 第19-20页 |
| ·通过RT制备牦牛肌肉组织cDNA与第一轮PCR筛选 | 第20-22页 |
| ·用ThermoScriptTM RT-PCR System试剂盒进行RT | 第20-22页 |
| ·PCR扩增反应 | 第22页 |
| ·通过PCR法从牦牛肌肉组织cDNA中筛选目的序列 | 第22-24页 |
| ·二次PCR | 第22-23页 |
| ·用第二次PCR扩增产物来进行第三次PCR扩增 | 第23-24页 |
| ·DNA片段的回收 | 第24-25页 |
| ·PCR产物与载体的连接 | 第25页 |
| ·转化实验 | 第25-26页 |
| ·感受态细菌的制备 | 第25-26页 |
| ·转化 | 第26页 |
| ·克隆筛选 | 第26-27页 |
| ·挑取克隆 | 第26-27页 |
| ·粗提质粒比较大小 | 第27页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第27-29页 |
| ·PCR鉴定 | 第27-28页 |
| ·质粒的提取与酶切鉴定 | 第28-29页 |
| ·质粒的提取 | 第28页 |
| ·酶切鉴定 | 第28-29页 |
| ·测序与序列分析 | 第29-30页 |
| ·测序 | 第29-30页 |
| ·序列分析 | 第30页 |
| 3 结果 | 第30-40页 |
| ·牦牛肌肉组织总RNA的提取 | 第30页 |
| ·RT-PCR | 第30-31页 |
| ·进行二次PCR | 第31-32页 |
| ·DNA片段的回收 | 第32页 |
| ·粗提质粒比较大小 | 第32-33页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第33-34页 |
| ·PCR鉴定 | 第33页 |
| ·质粒的提取与酶切鉴定 | 第33-34页 |
| ·质粒的提取 | 第33-34页 |
| ·酶切鉴定 | 第34页 |
| ·测序与序列分析 | 第34-40页 |
| ·测序 | 第34-35页 |
| ·序列分析 | 第35-40页 |
| 4 讨论 | 第40-43页 |
| ·关于采样的方法 | 第40页 |
| ·总RNA的提取 | 第40页 |
| ·RT-PCR | 第40-41页 |
| ·DNA片段的回收以及与载体的连接 | 第41页 |
| ·阳性克隆的挑取 | 第41-42页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第42-43页 |
| 5 参考文献: | 第43-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 附页1 | 第53-55页 |
| 附页2 | 第55-56页 |
