中文摘要 | 第1-8页 |
英文摘要 | 第8-10页 |
第一章 水稻遗传转化研究进展(文献综述) | 第10-29页 |
1 水稻遗传转化受体系统 | 第10-14页 |
1.1 原生质体 | 第10-13页 |
1.2 悬浮细胞系或部分酶解小细胞团 | 第13-14页 |
1.3 成熟胚诱导愈伤及种子胚 | 第14页 |
2 外源基因表达载体构建 | 第14-23页 |
2.1 报告基因 | 第15-17页 |
2.1.1 β-葡糖苷酸酶基因 | 第15-16页 |
2.1.2 荧光素酶基因 | 第16页 |
2.1.3 花色素苷调节剂基因 | 第16页 |
2.1.4 氯霉素乙酰转移酶基因 | 第16页 |
2.1.5 新酶素磷酸转移酶基因 | 第16-17页 |
2.2 选择标记基因 | 第17页 |
2.2.1 抗抗生素类 | 第17页 |
2.2.2 抗除草剂类 | 第17页 |
2.3 启动子 | 第17-21页 |
2.3.1 组成型启动子 | 第18-20页 |
2.3.2 非组成型启动子 | 第20-21页 |
2.4 3'端DNA序列 | 第21页 |
2.5 内含子与转基因表达活性 | 第21-23页 |
3 水稻遗传转化方法 | 第23-27页 |
3.1 PEG介导法 | 第23页 |
3.2 电激法 | 第23-24页 |
3.3 基因枪法 | 第24页 |
3.4 脂质体介导法 | 第24-25页 |
3.5 花粉管通道法 | 第25页 |
3.6 根癌农杆菌介导的转化法 | 第25-26页 |
3.7 超声波法 | 第26页 |
3.8 显微注射法 | 第26-27页 |
4 展望 | 第27-29页 |
第二章 MAR序列及其介导的转基因表达研究进展(文献综述) | 第29-36页 |
1 MAR序列的结构与功能 | 第30-32页 |
1.1 MAR序列的结构特征 | 第30-31页 |
1.2 MAR序列的功能特征 | 第31-32页 |
2 MAR序列与转基因表达 | 第32-34页 |
2.1 MAR序列减少或消除转基因表达的位置效应 | 第33-34页 |
2.2 MAR序列可减少同源依赖的转基因失活 | 第34页 |
2.3 MAR序列可为转基因表达产生松弛结构域 | 第34页 |
3 展望 | 第34-36页 |
第三章 水稻成熟胚诱导愈伤再生转化体系的建立 | 第36-45页 |
1 材料与方法 | 第36-39页 |
1.1 供试材料及种子预处理 | 第36-37页 |
1.1.1 供试材料 | 第36页 |
1.1.2 种子预处理 | 第36-37页 |
1.2 方法: | 第37-39页 |
1.2.1 水稻成熟胚诱导愈伤分化再生条件优化 | 第37页 |
1.2.2 成熟胚诱导愈伤再生培养基激素组合的优化 | 第37-38页 |
1.2.3 成熟胚盾片愈伤诱导 | 第38页 |
1.2.4 成熟胚盾片愈伤胚性细胞诱导及保持 | 第38页 |
1.2.5 成熟胚诱导愈伤胚性愈伤组织分化再生 | 第38-39页 |
2 结果与分析 | 第39-43页 |
2.1 水稻成熟胚诱导愈伤分化再生的品种和培养基组合的优化 | 第39-40页 |
2.2 水稻成熟胚盾片愈伤组织诱导 | 第40页 |
2.3 水稻成熟胚胚性愈伤组织诱导及保持 | 第40-42页 |
2.4 水稻成熟胚诱导愈伤植株再生 | 第42-43页 |
3 讨论 | 第43-45页 |
第四章 MAR序列介导的水稻成熟胚诱导愈伤基因枪遗传转化 | 第45-71页 |
1 材料与方法 | 第46-58页 |
1.1 材料 | 第46页 |
1.2 方法 | 第46-58页 |
1.2.1 表达质粒构建及纯化 | 第46-50页 |
1.2.2 转化受体材料制备及转化前预处理 | 第50页 |
1.2.3 基因枪转化的方法步骤 | 第50-51页 |
1.2.4 转化材料的抗性筛选及Bialaphos抗性愈伤再生成苗 | 第51-52页 |
1.2.5 转化再生苗的田间检测及分子检测 | 第52-58页 |
2 结果与分析 | 第58-67页 |
2.1 表达质粒构建及鉴定 | 第58-59页 |
2.2 基因枪转化后的抗性筛选及抗性愈伤分化成苗 | 第59-62页 |
2.3 转化植株田间和分子生物学检测 | 第62-65页 |
2.3.1 转化植株田间检测 | 第62-63页 |
2.3.2 转化再生植株PCR检测 | 第63-65页 |
2.4 转化植株的PCR-Southern和Southern检测 | 第65-66页 |
2.4.1 转化植株PCR-Southern检测 | 第65页 |
2.4.2 转化植株Southern检测 | 第65-66页 |
2.5 转化植株内转基因表达量的Northern分析 | 第66-67页 |
3 讨论 | 第67-71页 |
3.1 MAR序列介导提高水稻外源基因转化效率 | 第68-69页 |
3.2 MAR序列介导增强转基因表达水平 | 第69页 |
3.3 MAR序列介导促进转基因表达 | 第69-71页 |
参考文献 | 第71-79页 |
附录 | 第79-81页 |