| 中文摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 前言 | 第10-23页 |
| 阿尔茨海默病 | 第10-15页 |
| 1. β-淀粉样蛋白的沉积与AD | 第10-12页 |
| 2. Tau蛋白的异常磷酸化与AD | 第12-13页 |
| 3. PS基因的突变与AD | 第13-14页 |
| 4. ApoE等位基因多态性与AD | 第14-15页 |
| miRNAs的概述 | 第15-19页 |
| 1. miRNAs的生成和作用方式 | 第15-16页 |
| 2. miRNA在神经系统中的表达 | 第16-17页 |
| 3. miRNAs在神经系统的作用 | 第17-18页 |
| 4. miRNAs在神经系统疾病中的作用 | 第18-19页 |
| TGF-beta信号通路 | 第19-23页 |
| 1. TGF-beta信号通路概况 | 第19-21页 |
| 2. TGF-beta信号通路与神经系统 | 第21-23页 |
| 第一部分 microRNA在阿尔茨海默病中的作用研究 | 第23-69页 |
| (一) 材料 | 第23-26页 |
| 1. 实验动物 | 第23页 |
| 2. 主要生化试剂 | 第23-24页 |
| 3. 主要溶液配置 | 第24-25页 |
| 4. 主要仪器设备 | 第25-26页 |
| (二) 实验方法 | 第26-47页 |
| 1. APP~(swe)/PSΔE9 mice转基因小鼠模型的制备和鉴定 | 第26-27页 |
| 2. MicroRNA microarray | 第27-28页 |
| 3. Real-Time Reverse Transcriptase(RT)-PCR | 第28-31页 |
| 4. Hsa-miR-106b表达载体的制备 | 第31-36页 |
| 5. Hsa-miR-106b稳定转细胞系的建立、鉴定及细胞处理 | 第36-37页 |
| 6. Hsa-miR-106b靶基因的预测 | 第37页 |
| 7. 转化后菌落的插入片段阳性克隆快速鉴定 | 第37-38页 |
| 8. TGFBR23'UTR荧光素酶报告载体的构建 | 第38-43页 |
| 9. 萤光素酶活性的检测 | 第43-44页 |
| 10. microRNA knockdown | 第44-45页 |
| 11. Western blot检测TGFBR2、Smad2/3和pSmad2/3的表达水平 | 第45-47页 |
| 12. 统计学分析 | 第47页 |
| (三) 结果 | 第47-62页 |
| 1. 转基因鼠鼠尾DNA鉴定结果 | 第47-48页 |
| 2. RNA质量的鉴定 | 第48-49页 |
| 3. APP~(swe)/PSΔE9转基因小鼠和对照小鼠脑组织中hsa-miR-106b的表达情况 | 第49-51页 |
| 4. 质粒转化Top10感受态细胞 | 第51页 |
| 5. Hsa-miR-106b稳转细胞的构建和鉴定 | 第51-52页 |
| 6. Hsa-miR-106b靶基因的预测 | 第52-53页 |
| 7. Western blot检测靶基因蛋白的表达情况,在培养细胞中hsa-miR-106b的表达与TGFBR2蛋白的表达呈负相关 | 第53-55页 |
| 8. Hsa-miR-106b与TGFBR2 mRNA 3'UTR之间的相互作用 | 第55-58页 |
| 9. 维甲酸诱导hsa-miR-106b稳转细胞的结果 | 第58-59页 |
| 10. Hsa-miR-106b可能通过下调TGFBR2的表达,抑制Smad2/3介导的TGF-β信号通路的活性,从而影响神经细胞的生存 | 第59-60页 |
| 11. Aβ42诱导SH-SY5Y细胞对hsa-miR-106b表达的影响 | 第60-61页 |
| 12. APP~(swe)/PSΔE9小鼠脑组织中TGFBR2蛋白的表达 | 第61-62页 |
| (四) 讨论 | 第62-69页 |
| 1. miR-106b在APP~(swe)/PSΔE9小鼠脑组织中的表达 | 第63页 |
| 2. miR-106b靶基因的选择 | 第63-64页 |
| 3. miR-106b调控TGFBR2的表达 | 第64页 |
| 4. TGF-β信号通路与阿尔茨海默病 | 第64-65页 |
| 5. miRNAs表达的调控 | 第65-66页 |
| 6. miRNAs与阿尔茨海默病 | 第66-69页 |
| 第二部分 miRNA-106b转基因小鼠的建立和分析 | 第69-77页 |
| (一) 实验方法 | 第69-71页 |
| 1. Hsa-miR-106b转基因小鼠的制备 | 第69-70页 |
| 2. 转基因阳性鼠基因型的PCR鼠尾鉴定 | 第70-71页 |
| 3. Real time PCR检测hsa-miR-106b转基因阳性小鼠的表达情况 | 第71页 |
| 4. Western blot检测hsa-miR-106b转基因阳性小鼠靶蛋白的表达情况 | 第71页 |
| (二) 结果 | 第71-75页 |
| 1. Hsa-miR-106b转基因小鼠的制备 | 第71-72页 |
| 2. PCR鉴定hsa-miR-106b转基因阳性小鼠结果 | 第72页 |
| 3. Real time RT-PCR检测hsa-miR-106b转基因阳性小鼠的表达情况 | 第72-74页 |
| 4. Western blot检测hsa-miR-106b转基因阳性小鼠靶蛋白的表达情况 | 第74-75页 |
| (三) 讨论 | 第75-77页 |
| 小结 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-90页 |
| 附录 | 第90-104页 |
| 缩写表 | 第104-106页 |
| 个人简历 | 第106-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
