| 摘要 | 第1-5页 |
| Summary | 第5-11页 |
| 英文缩略表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-21页 |
| ·疯牛病定义及海绵状脑病的特征 | 第12页 |
| ·海绵状脑病的致病原 | 第12-17页 |
| ·PrPC 和PrPSc 的基本特征 | 第13-15页 |
| ·PrPC 的生理功能 | 第15-17页 |
| ·朊蛋白的制备 | 第17-19页 |
| ·E.coli 原核表达系统 | 第17-18页 |
| ·真核表达系统 | 第18-19页 |
| ·表达载体 | 第19-20页 |
| ·启动子是影响外源基因表达效率的关键因素 | 第19页 |
| ·多聚腺苷酸加尾信号 | 第19页 |
| ·插入序列（IVS） | 第19页 |
| ·Kozak 序列对表达的影响 | 第19-20页 |
| ·本研究的目的 | 第20-21页 |
| 第二章 PrP102-242 在COS-7 细胞中的表达及检测 | 第21-33页 |
| 1 前言 | 第21页 |
| 2 材料和方法 | 第21-28页 |
| ·材料 | 第21-22页 |
| ·菌株、载体和细胞株 | 第21页 |
| ·主要试剂和工具酶 | 第21-22页 |
| ·仪器与设备 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22页 |
| ·常规溶液和缓冲液 | 第22页 |
| ·方法 | 第22-25页 |
| ·PCR 引物设计和扩增 | 第22-23页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第23页 |
| ·纯化PCR 产物的双酶切和PCR 清洁 | 第23-24页 |
| ·pCI-neo 载体质粒的提取 | 第24页 |
| ·pCI-neo 载体质粒的双酶切 | 第24页 |
| ·目的DNA 片段与pCI-neo 的连接 | 第24页 |
| ·连接产物的转化 | 第24页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第24-25页 |
| ·重组质粒pCIneo-PrP102-242 双酶切鉴定 | 第25页 |
| ·重组质粒的测序和序列分析 | 第25页 |
| ·细胞转染及阳性细胞克隆的筛选 | 第25-26页 |
| ·脂质体转染及RT-PCR 检测 | 第25-26页 |
| ·阳性细胞克隆的筛选 | 第26页 |
| ·表达蛋白的检测 | 第26-28页 |
| ·间接免疫荧光检测目的蛋白 | 第26-27页 |
| ·间接ELISA 检测细胞上清中蛋白表达 | 第27页 |
| ·间接ELISA 检测细胞中蛋白的表达 | 第27页 |
| ·Western blot 检测细胞中蛋白的表达 | 第27-28页 |
| 3 结果 | 第28-32页 |
| ·重组表达载体构建 | 第28-29页 |
| ·PCR 结果鉴定 | 第28页 |
| ·PrP 基因的克隆和真核表达载体的构建 | 第28-29页 |
| ·细胞转染及阳性细胞克隆的筛选 | 第29-30页 |
| ·RT-PCR 检测转染 | 第29页 |
| ·阳性细胞克隆的筛选 | 第29-30页 |
| ·检测结果 | 第30-32页 |
| ·间接免疫荧光检测 | 第30页 |
| ·间接ELISA 检测细胞上清 | 第30-31页 |
| ·间接ELISSA 检测细胞中蛋白 | 第31页 |
| ·Western blot 检测结果 | 第31-32页 |
| 4 讨论 | 第32-33页 |
| 第三章 PrP1-264 在COS-7 中的表达及生物活性检测 | 第33-41页 |
| 1 前言 | 第33页 |
| 2 材料和方法 | 第33-35页 |
| ·材料 | 第33页 |
| ·菌株、载体，细胞、试剂以及酶 | 第33页 |
| ·PCR 引物设计 | 第33页 |
| ·方法 | 第33-35页 |
| ·表达载体的构建 | 第33-35页 |
| ·细胞转染及阳性细胞克隆的筛选 | 第35页 |
| 3 表达蛋白的检测 | 第35-36页 |
| ·间接免疫荧光检测目的蛋白的表达 | 第35页 |
| ·间接ELISA 检测细胞中蛋白的表达 | 第35页 |
| ·Western blot 检测 | 第35-36页 |
| 4 结果 | 第36-39页 |
| ·重组表达载体构建结果 | 第36-37页 |
| ·PCR 结果鉴定 | 第36页 |
| ·PrP 基因的克隆和真核表达载体的构建 | 第36-37页 |
| ·细胞转染及阳性细胞克隆的筛选鉴定 | 第37页 |
| ·RT-PCR 检测转染 | 第37页 |
| ·阳性细胞克隆的筛选 | 第37页 |
| ·检测结果 | 第37-39页 |
| ·间接免疫荧光检测结果 | 第37-38页 |
| ·间接ELISSA 检测细胞中蛋白结果 | 第38页 |
| ·Western blot 检测结果 | 第38-39页 |
| 5 讨论 | 第39-41页 |
| 第四章 结论 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 作者简介 | 第48-50页 |
| 导师简介 | 第50-51页 |
