| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-25页 |
| 1 油菜菌核病 | 第11-14页 |
| ·核盘菌的分类及生物学特性 | 第11-12页 |
| ·菌核病的症状及危害 | 第12页 |
| ·菌核病的侵染途径 | 第12页 |
| ·核盘菌的致病机理 | 第12-13页 |
| ·核盘菌的防治情况 | 第13-14页 |
| 2 植物防卫反应机制 | 第14-16页 |
| ·基因对基因抗性—R基因介导 | 第15页 |
| ·过敏性反应(hypersensitive reaction,HR) | 第15-16页 |
| ·系统获得性抗性(system acquired resistance SAR) | 第16页 |
| ·植物抗病反应的信号传导途径 | 第16页 |
| 3 抑制消减杂交技术 | 第16-18页 |
| ·SSH技术原理 | 第17页 |
| ·SSH的技术流程 | 第17页 |
| ·SSH技术的优缺点 | 第17-18页 |
| ·SSH技术在植物上的应用 | 第18页 |
| 4 油菜抗病基因工程研究进展 | 第18-20页 |
| 5 PGIP的研究进展 | 第20-22页 |
| 6 甘蓝型油菜宁RS-1 | 第22-23页 |
| 7 本研究的目的意义 | 第23-25页 |
| 第二章 核盘菌诱导下宁RS-1 SSH文库构建 | 第25-43页 |
| 1 实验材料 | 第25-26页 |
| ·材料 | 第25-26页 |
| ·实验中所使用的试剂 | 第26页 |
| 2 实验方法 | 第26-35页 |
| ·取样 | 第26页 |
| ·不同方法提取甘蓝型油菜宁RS-1RNA | 第26-27页 |
| ·核盘菌接种甘蓝型油菜宁RS-1的方法 | 第27-28页 |
| ·mRNA的纯化 | 第28页 |
| ·PCR-选择cDNA减法杂交过程 | 第28-35页 |
| 3 结果 | 第35-41页 |
| ·关于总RNA的不同提取方法 | 第35-36页 |
| ·甘蓝型油菜宁RS-1叶片总RNA纯度和质量检测 | 第36-37页 |
| ·甘蓝型油菜宁RS-1叶片mRNA纯化电泳检测 | 第37页 |
| ·甘蓝型油菜宁RS-1 cDNA和cDNA经RsaⅠ酶切后电泳检测 | 第37-38页 |
| ·第一轮差减杂交PCR产物检测 | 第38-39页 |
| ·第二轮差减杂交PCR产物检测 | 第39页 |
| ·正向,反向差减杂交菌落PCR检测重组率和插入片段 | 第39-40页 |
| ·正向和反向杂交文库库容量的鉴定 | 第40页 |
| ·EST测序及分析 | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| ·关于甘蓝型油菜宁RS-1抑制消减cDNA文库的构建 | 第41-42页 |
| ·关于EST测序分析 | 第42-43页 |
| 第三章 PGIP过表达载体构建及半定量PCR分析 | 第43-59页 |
| 1 实验材料 | 第44页 |
| ·材料 | 第44页 |
| ·实验中所用的试剂,酶及菌株 | 第44页 |
| 2 试验方法 | 第44-49页 |
| ·油菜PGIP基因克隆 | 第44-47页 |
| ·CTAB法提取甘蓝型油菜宁RS-1基因组DNA | 第44页 |
| ·引物设计及目的基因的PCR扩增 | 第44-47页 |
| ·油菜PGIP基因表达分析 | 第47页 |
| ·RNA提取 | 第47页 |
| ·半定量RT-PCR | 第47页 |
| ·油菜PGIP基因过表达载体构建 | 第47-49页 |
| 3 结果分析 | 第49-55页 |
| ·基因组DNA的提取结果 | 第49页 |
| ·PGIP基因的克隆 | 第49-52页 |
| ·对克隆到的PGIP氨基酸序列进行分析 | 第52页 |
| ·对克隆到的PGIP进行信号肽分析 | 第52-53页 |
| ·PGIP基因半定量PCR分析 | 第53-54页 |
| ·35S启动子 | 第54-55页 |
| ·过量表达载体茵落PCR检测 | 第55页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA-PGIP酶切验证 | 第55页 |
| 4 讨论 | 第55-59页 |
| 第四章 全文结论及创新点 | 第59-61页 |
| 1 全文结论 | 第59页 |
| 2 创新之处 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-71页 |
| 附录 | 第71-73页 |
| 攻读硕士学位期间已发表和待发表的论文 | 第73-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
