| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 前言 | 第10-23页 |
| 1 研究背景 | 第10-21页 |
| ·人巨细胞病毒 | 第10-12页 |
| ·pUL23 | 第12-14页 |
| ·pUL49 | 第14-16页 |
| ·构建稳定细胞系的方法 | 第16-21页 |
| 2 研究的目的及意义 | 第21-23页 |
| ·目的 | 第21-22页 |
| ·意义 | 第22-23页 |
| 实验材料与仪器 | 第23-30页 |
| 1 仪器 | 第23-24页 |
| 2 质粒、菌株、细胞株 | 第24-25页 |
| 3 主要试剂 | 第25-27页 |
| 4 主要试剂配方 | 第27-30页 |
| 实验方法 | 第30-53页 |
| 1 逆转录病毒感染法构建稳定细胞系 | 第30-44页 |
| ·构建逆转录病毒载体 | 第30-40页 |
| ·AmphoPack~(TM)-293的培养 | 第40-41页 |
| ·逆转录病毒的包装、收集以及滴度的测定 | 第41-42页 |
| ·HFF、HELF细胞的培养 | 第42-43页 |
| ·HFF、HELF细胞G418工作浓度的筛选 | 第43页 |
| ·逆转录病毒的感染 | 第43-44页 |
| ·稳定细胞系的筛选及扩增、保存 | 第44页 |
| 2 脂质体转染方法构建稳定细胞系 | 第44-49页 |
| ·构建真核表达载体 | 第44-47页 |
| ·HELA细胞的培养 | 第47-48页 |
| ·HELA细胞G418工作浓度的筛选 | 第48页 |
| ·HELA细胞的转染 | 第48页 |
| ·稳定细胞系的筛选及扩增、保存 | 第48-49页 |
| 3 稳定表达HCMV pUL23和pUL49哺乳动物细胞系的鉴定 | 第49-52页 |
| ·稳定表达pUL23、pUL49哺乳动物细胞系的RT-PCR鉴定稳定 | 第49-50页 |
| ·稳定表达pUL23、pUL49哺乳动物细胞系的Western-blotting鉴定 | 第50-51页 |
| ·稳定表达pUL23、pUL49哺乳动物细胞系的免疫荧光鉴定 | 第51-52页 |
| 4 Towne病毒株在稳定表达pUL23、pUL49 HFF细胞系中生长动力学检测 | 第52-53页 |
| ·Towne病毒株能否感染稳定表达pUL23、pUL49 HFF细胞系的检测 | 第52页 |
| ·Towne病毒株在稳定表达pUL23、pUL49 HFF细胞系中的多步生长曲线 | 第52-53页 |
| 第一章 稳定表达pUL23的哺乳动物细胞系的建立及鉴定 | 第53-68页 |
| 一 结果与分析 | 第53-66页 |
| 1 逆转录病毒介导的稳定表达HCMV pUL23 HFF、HELF细胞系建立及鉴定 | 第53-62页 |
| ·构建逆转录病毒载体pLEGFP-N1-UL23-FLAG | 第53-55页 |
| ·AmphoPack~(TM)-293的培养 | 第55页 |
| ·AmphoPack~(TM)-293转染 | 第55-56页 |
| ·HFF、HELF细胞的培养 | 第56页 |
| ·HFF、HELF细胞G418工作浓度的确定 | 第56-57页 |
| ·HFF、HELF细胞的感染 | 第57-58页 |
| ·HFF、HELF稳定细胞系的筛选和扩增 | 第58-59页 |
| ·稳定表达HCMV pUL23的HFF、HELF细胞系的RT-PCR鉴定 | 第59-60页 |
| ·稳定表达HCMV pUL23的HFF、HELF细胞系的western-blotting鉴定 | 第60-61页 |
| ·稳定表达HCMV pUL23的HFF、HELF细胞系的免疫荧光鉴定 | 第61-62页 |
| 2 脂质体转染方法介导的稳定表达HCMV pUL23 HELA细胞系构建及鉴定 | 第62-66页 |
| ·构建真核表达载体 | 第62-64页 |
| ·HELA细胞的培养 | 第64页 |
| ·HELA细胞G418工作浓度的确定 | 第64-65页 |
| ·稳定表达HCMV pUL23的HELA细胞系的RT-PCR鉴定 | 第65页 |
| ·稳定表达HCMV pUL23的HELA细胞系的Western-blotting鉴定 | 第65-66页 |
| ·稳定表达HCMV pUL23的HELA细胞系的免疫荧光鉴定 | 第66页 |
| 二 讨论 | 第66-67页 |
| 三 小结 | 第67-68页 |
| 第二章 稳定表达pUL49的哺乳动物细胞系的建立及鉴定 | 第68-75页 |
| 一 结果与分析 | 第68-73页 |
| 1 逆转录病毒介导的稳定表达HCMV pUL49 HFF、HELF细胞系建立及鉴定 | 第68-73页 |
| ·构建逆转录病毒载体pLEGFP-N1-UL49-MYC | 第68-70页 |
| ·AmphoPack~(TM)-293转染 | 第70页 |
| ·HFF、HELF细胞的感染 | 第70页 |
| ·HFF、HELF稳定细胞系的筛选和扩增 | 第70页 |
| ·稳定表达HCMV pUL49的HFF、HELF细胞系的RT-PCR鉴定 | 第70-71页 |
| ·稳定表达HCMV pUL49的HFF、HELF细胞系的western-blotting鉴定 | 第71-72页 |
| ·稳定表达HCMV pUL49的HFF、HELF细胞系的免疫荧光鉴定 | 第72-73页 |
| 二 讨论 | 第73-74页 |
| 三 小结 | 第74-75页 |
| 第三章 Towne在稳定表达pUL23和pUL49的HFF细胞中的生长动力学检测 | 第75-78页 |
| 一 结果与分析 | 第75-77页 |
| 1 Towne病毒株能否感染稳定表达pUL23、pUL49 HFF细胞系的检测 | 第75-76页 |
| 2 Towne病毒株在稳定表达pUL23、pUL49 HFF细胞系中的多步生长曲线 | 第76-77页 |
| 二 讨论 | 第77页 |
| 三 小结 | 第77-78页 |
| 全文讨论 | 第78-81页 |
| 1 关于构建稳定细胞系方法的选择 | 第78页 |
| 2 逆转录病毒的包装和感染 | 第78-79页 |
| 3 G418筛选阳性克隆 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-88页 |
| 附录 | 第88-95页 |
| 致谢 | 第95页 |
