| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 英文缩略表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 奶牛乳房炎研究进展 | 第12-22页 |
| 1 奶牛乳房炎主动免疫制剂 | 第12-15页 |
| ·金黄色葡萄球菌疫苗 | 第12-13页 |
| ·链球菌疫苗 | 第13-14页 |
| ·大肠杆菌疫苗 | 第14-15页 |
| ·卵黄抗体 | 第15页 |
| 2 奶牛乳房炎其它防治制剂 | 第15-17页 |
| ·抗菌肽 | 第15-16页 |
| ·溶菌酶 | 第16页 |
| ·中草药制剂 | 第16-17页 |
| ·其它制剂 | 第17页 |
| 3 致奶牛乳房炎金黄色葡萄菌的研究进展 | 第17-22页 |
| ·金黄色葡萄菌引发的奶牛乳房炎 | 第17-18页 |
| ·金黄色葡萄菌的毒力因子及保护性抗原 | 第18-22页 |
| ·金黄色葡萄菌的基因组特征 | 第18-19页 |
| ·毒力因子 | 第19-20页 |
| ·保护性抗原的研究进展 | 第20-22页 |
| 第二章 实验研究 | 第22-61页 |
| 实验一 金黄色葡萄球FnBP、ClfA基因的克隆及序列分析 | 第22-37页 |
| 1 材料和方法 | 第22-27页 |
| ·实验材料 | 第22-23页 |
| ·菌株、质粒和试剂 | 第22页 |
| ·主要仪器设备 | 第22-23页 |
| ·金黄色葡萄球菌基因组的提取 | 第23-27页 |
| ·引物设计与基因片段的PCR扩增 | 第23-27页 |
| ·引物设计与合成 | 第23页 |
| ·FnBP基因片段的PCR扩增 | 第23-24页 |
| ·ClfA基因片段的PCR扩增 | 第24页 |
| ·目的基因FnBP和ClfA的回收 | 第24页 |
| ·目的基因FnBP和ClfA与克隆载体的连接 | 第24-25页 |
| ·连接产物转化E.coli DH_(5a)感受态细胞 | 第25页 |
| ·pMD18-T-FnBP、pMD18-T-ClfA重组质粒的鉴定 | 第25-27页 |
| ·目的基因FnBP和ClfA的序列测定及序列分析 | 第27页 |
| 2 结果 | 第27-35页 |
| ·FnBP和ClfA基因片段的PCR扩增结果 | 第27-28页 |
| ·菌液PCR鉴定目的基因FnBP和ClfA重组质粒 | 第28-29页 |
| ·FnBP和ClfA基因的克隆及酶切鉴定结果 | 第29-30页 |
| ·FnBP和ClfA核苷酸序列的分析 | 第30-35页 |
| ·FnBP核苷酸序列的分析 | 第30-33页 |
| ·ClfA核苷酸序列的分析 | 第33-35页 |
| 3 讨论 | 第35-37页 |
| 实验二 金黄色葡萄球菌FnBP基因重组牛痘病毒的构建蚀斑纯化及其鉴定 | 第37-53页 |
| 1 材料和方法 | 第38-44页 |
| ·实验材料 | 第38页 |
| ·菌株、质粒和试剂 | 第38页 |
| ·主要仪器设备 | 第38页 |
| ·金黄色葡萄球菌FnBP基因重组穿梭载体pSC11-FnBP的构建 | 第38-39页 |
| ·pSC11、pMD18-T-FnBP的酶切 | 第38页 |
| ·目的基因FnBP与pSC11转移载体的连接 | 第38-39页 |
| ·连接产物转化E.coli DH_(5a)感受态细胞 | 第39页 |
| ·金黄色葡萄球菌FnBP基因重组穿梭载体pSC11-FnBP的鉴定 | 第39-40页 |
| ·菌落PCR鉴定pSC11-FnBP | 第39-40页 |
| ·pSC11-FnBP转移质粒的测序鉴定 | 第40页 |
| ·重组牛痘病毒的构建 | 第40-41页 |
| ·BHK-21细胞的培养 | 第40页 |
| ·重组转移载体转染BHK-21细胞 | 第40-41页 |
| ·重组牛痘病毒pSC11-FnBP的纯化 | 第41页 |
| ·重组牛痘病毒pSC11-FnBP的鉴定 | 第41-44页 |
| ·目的基因FnBP重组牛痘病毒基因组的PCR检测 | 第41-42页 |
| ·目的基因FnBP转录水平的检测(RT-PCR检测) | 第42-43页 |
| ·Western-blotting检验目的基因FnBP的表达 | 第43-44页 |
| ·重组牛痘病毒pSC11-FnBP生长特性的检测(TCID_(50)检测) | 第44页 |
| 2 结果 | 第44-50页 |
| ·重组穿梭载体pSC11-FnBP的PCR鉴定结果 | 第44-45页 |
| ·重组穿梭载体pSC11-FnBP的测序结果 | 第45-46页 |
| ·重组牛痘病毒pSC11-FnBP的纯化结果 | 第46-47页 |
| ·PCR及RT-PCR检测目的基因FnBP的重组结果 | 第47-48页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳及Western-blotting检测外源基因的表达 | 第48-49页 |
| ·TCID_(50)检测牛痘弱毒株病毒与重组牛痘病毒pSC11-FnBP的毒价结果 | 第49-50页 |
| 3 讨论 | 第50-53页 |
| 实验三 表达金黄色葡萄菌FnBP基因重组牛痘病毒安全性及免疫原性的初步研究 | 第53-61页 |
| 1 材料和方法 | 第53-56页 |
| ·实验材料 | 第53-54页 |
| ·菌株、质粒和试剂 | 第53-54页 |
| ·主要仪器设备 | 第54页 |
| ·重组牛痘病毒安全性检测 | 第54-55页 |
| ·动物免疫 | 第54页 |
| ·病理变化的检测 | 第54-55页 |
| ·重组牛痘病毒免疫原性初步检测 | 第55-56页 |
| ·小鼠IFN-γ的检测 | 第55页 |
| ·中性粒细胞吞噬功能的测定 | 第55-56页 |
| ·小鼠免疫保护试验 | 第56页 |
| 2 结果 | 第56-59页 |
| ·小鼠的眼观病理变化结果 | 第56页 |
| ·病理组织切片的结果 | 第56-57页 |
| ·小鼠IFN-γ的检测结果 | 第57-58页 |
| ·中性粒细胞吞噬功能的测定结果 | 第58页 |
| ·小鼠免疫保护试验结果 | 第58-59页 |
| 3 讨论 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-65页 |
| 研究结论 | 第65-66页 |
| 创新点 | 第66-67页 |
| 附录一:试验路线图 | 第67-68页 |
| 附录二:载体pSC11的图谱 | 第68-69页 |
| 附录三:重组穿梭载体构建图 | 第69-70页 |
| 附录四:主要试剂的配制 | 第70-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 研究资助 | 第73-74页 |
| 作者简介 | 第74-75页 |
| 导师评阅表 | 第75页 |
