| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-41页 |
| ·mRNA的可变剪接 | 第13-20页 |
| ·mRNA剪接的基本方式 | 第13-16页 |
| ·mRNA可变剪接的含义和生物学意义 | 第16-17页 |
| ·可变剪接的类型 | 第17-18页 |
| ·可变剪接的顺式作用元件与反式调控因子 | 第18-20页 |
| ·HBV的可变剪接和转录后调控元件 | 第20-30页 |
| ·乙肝病毒的基本概况 | 第20-23页 |
| ·乙肝病毒的蛋白 | 第23-25页 |
| ·乙肝病毒RNA的剪接 | 第25-28页 |
| ·乙肝病毒RNA剪接变体的发现 | 第25页 |
| ·乙肝病毒RNA剪接变体所提出的科学问题 | 第25-26页 |
| ·乙肝病毒RNA剪接研究进展 | 第26-28页 |
| ·HBV转录后调控元件(Posttranscriptional Regulatory Element,PRE) | 第28-30页 |
| ·SMN基因可变剪接 #]8 | 第30-33页 |
| ·SMA与SMN基因 | 第30-31页 |
| ·SMN基因的可变剪接 | 第31-33页 |
| ·mRNA的二级结构和可变剪接 | 第33-40页 |
| ·mRNA二级结构调节可变剪接的方式 | 第33-35页 |
| ·a mRNA二级结构对剪接因子结合的影响 | 第33-34页 |
| ·b mRNA二级结构对剪接反应的保守序列的影响 | 第34页 |
| ·c mRNA二级结构对外显子/内含子剪接增强子或沉默子的影响 | 第34-35页 |
| ·d 二级结构的远距离作用对前体mRNA的影响 | 第35页 |
| ·研究RNA二级结构的主要实验方法 | 第35-40页 |
| ·化学修饰常用的试剂 | 第36-39页 |
| ·核酸酶切割探测RNA二级结构 | 第39-40页 |
| ·本论文的研究内容和意义 | 第40-41页 |
| 第二章. 材料与方法 | 第41-67页 |
| 1. 材料 | 第41-53页 |
| ·菌株、细胞系及质粒 | 第41页 |
| ·主要生化试剂 | 第41-42页 |
| ·细胞操作相关试剂 | 第42页 |
| ·酶类 | 第42-43页 |
| ·同位素相关 | 第43页 |
| ·本实验中所用引物 | 第43-45页 |
| ·本实验中构建的克隆 | 第45-48页 |
| ·分析软件 | 第48页 |
| ·绘图软件 | 第48页 |
| ·仪器 | 第48-49页 |
| ·溶液的配制 | 第49-53页 |
| ·抗生素溶液 | 第49页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒试剂 | 第49页 |
| ·大肠杆菌制感受态溶液 | 第49-50页 |
| ·DMEM细胞培养基 | 第50-51页 |
| ·细胞用PBS缓冲液 | 第51页 |
| ·PAGE胶所需溶液 | 第51-52页 |
| ·SDS-PAGE胶所需溶液 | 第52-53页 |
| ·Westem杂交有关试剂 | 第53页 |
| 2. 方法 | 第53-67页 |
| ·普通克隆的构建方法 | 第53页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备与转化 | 第53-54页 |
| ·受体菌的培养 | 第53页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第53-54页 |
| ·DNA转化 | 第54页 |
| ·大肠杆菌电转感受态制备与转化 | 第54-55页 |
| ·转染用超纯质粒的制备 | 第55页 |
| ·细胞传代培养 | 第55-59页 |
| ·细胞复苏 | 第55-56页 |
| ·细胞传代培养 | 第56页 |
| ·细胞转染 | 第56-58页 |
| ·细胞冻存 | 第58-59页 |
| ·RT-PCR | 第59-61页 |
| ·RNA的提取 | 第59页 |
| ·基因组DNA的消解 | 第59-60页 |
| ·RNA的逆转录 | 第60页 |
| ·以合成的cONA为模板进行PCR | 第60-61页 |
| ·放射性PCR检测HBV pgRNA剪接 | 第61页 |
| ·删除和替代突变克隆的构建 | 第61-62页 |
| ·RNA的制备 | 第62-63页 |
| ·RNA的体外转录 | 第62页 |
| ·转录后的RNA的PAGE胶纯化回收和定量 | 第62-63页 |
| ·标记DNA oligo的方法 | 第63页 |
| ·核酸酶印迹实验的基本方法(Rnase footprinting assay) | 第63-65页 |
| ·Rnase footprinting步骤 | 第64页 |
| ·测序胶AGTC ladder用PCR法 | 第64-65页 |
| ·注意事项 | 第65页 |
| ·Western杂交 | 第65-67页 |
| 第三章. 结果和讨论 | 第67-84页 |
| ·pZW8-SMN1 ISS报告质粒的原理 | 第67-68页 |
| ·HBV PRE在pZW8-SMN1剪接报告基因的内含子里具有可变剪接抑制功能(ISS) | 第68-76页 |
| ·HBV全基因组序列筛选发现PRE具有ISS的功能 | 第68-69页 |
| ·HBV PRE的最小ISS功能片段的确定 | 第69-71页 |
| ·PRE2的ISS功能片段具有位置效应 | 第71-72页 |
| ·反式作用因子PTB对pre2bcd剪接沉默子功能没有明显的调控作用 | 第72-74页 |
| ·pre2bcd在HBV pgRNA的主要剪接产物SP1剪接的影响 | 第74-76页 |
| ·HBV PRE ISS功能片段的二级结构的探测 | 第76-80页 |
| ·15T的替换突变对pre2bcd功能的影响 | 第76-78页 |
| ·核酸内切酶印迹实验探测pre2bcd RNA局部的二级结构 | 第78-80页 |
| ·讨论与展望 | 第80-84页 |
| 参考文献 | 第84-95页 |
| 研究生期间发表或待发表论文 | 第95-96页 |
| 致谢 | 第96页 |
