| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-11页 |
| 专业名词缩写中英对照表 | 第11-12页 |
| 第一章 MicroRNA-375过表达转基因小鼠IGF2R基因的印记状态研究 | 第12-45页 |
| 前言 | 第12-17页 |
| 实验技术路线 | 第17-18页 |
| 1 IGF2R基因及其反义转录本Air的表达分析 | 第18-22页 |
| ·主要实验材料与仪器 | 第18页 |
| ·组织总RNA的提取 | 第18-19页 |
| ·总RNA的DNaseⅠ处理 | 第19页 |
| ·RNA的纯化 | 第19-20页 |
| ·逆转录得到cDNA | 第20页 |
| ·实时荧光定量PCR引物设计 | 第20-21页 |
| ·实时荧光定量PCR检测IGF2R及Air表达水平 | 第21-22页 |
| 2 IGF2R基因差异甲基化区域的DNA甲基化分析 | 第22-31页 |
| ·主要实验材料与仪器 | 第22-24页 |
| ·DNA的重亚硫酸盐修饰 | 第24-25页 |
| ·修饰后产物的纯化 | 第25页 |
| ·重亚硫酸盐测序法PCR引物设计 | 第25-26页 |
| ·DMR区特异性片段PCR扩增 | 第26页 |
| ·DMR区特异性片段PCR产物胶回收纯化 | 第26-27页 |
| ·DMR区特异性PCR产物片段与T载体连接 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌E.coli DH5α感受态的制备 | 第28-29页 |
| ·氨苄抗性培养平板的准备 | 第29页 |
| ·T载体连接产物转化感受态E.coli DH5α | 第29页 |
| ·阳性克隆质粒的小量制备 | 第29-30页 |
| ·阳性克隆质粒的测序 | 第30-31页 |
| 3 结果 | 第31-42页 |
| ·Real-time PCR检测肝、肺、肾组织中IGF2R及Air的表达 | 第31-35页 |
| ·IGF2R基因DMR区甲基化状态分析 | 第35-42页 |
| ·DMR区目的片段的扩增 | 第35页 |
| ·IGF2R基因DMR1区甲基化检测结果 | 第35-38页 |
| ·IGF2R基因DMR2区甲基化检测结果 | 第38-42页 |
| 4 讨论 | 第42-44页 |
| 5 结论 | 第44-45页 |
| 第二章 进行性核连缀转录分析(Nuclear run-on assay)实验方法的建立 | 第45-62页 |
| 前言 | 第45-47页 |
| 1 材料和方法 | 第47-49页 |
| ·材料 | 第47页 |
| ·试剂 | 第47-48页 |
| ·仪器 | 第48-49页 |
| 2 方法 | 第49-56页 |
| ·细胞的制备 | 第49-50页 |
| ·冻存细胞复苏 | 第49页 |
| ·细胞传代与培养 | 第49页 |
| ·细胞转染 | 第49-50页 |
| ·细胞核的抽提 | 第50-51页 |
| ·体外转录 | 第51-52页 |
| ·新生mRNA的纯化 | 第52页 |
| ·膜的制备 | 第52-54页 |
| ·Hela细胞cDNA的制备 | 第52-53页 |
| ·目的基因cDNA片段的获得 | 第53页 |
| ·目的基因cDNA片段的胶回收纯化 | 第53页 |
| ·硝酸纤维素膜的制备 | 第53-54页 |
| ·杂交 | 第54页 |
| ·洗膜 | 第54页 |
| ·放射自显影 | 第54页 |
| ·试剂配制 | 第54-56页 |
| 3 结果 | 第56-59页 |
| ·目的基因片段的制备 | 第56-57页 |
| ·进行性核连缀转录分析(Nuclear run-on assay) | 第57-59页 |
| 4 讨论 | 第59-61页 |
| 5 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 综述 | 第67-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 攻读硕士学位期间发表的文章 | 第81-82页 |
| 个人简历 | 第82页 |
